Ity lahatsoratra ity dia anisan'ny lohahevitra fikarohana "Fanatsarana ny fanoheran'ny legioma amin'ny mikraoba sy bibikely", jereo ny lahatsoratra 5 rehetra
Ny antony mahatonga ny aretin'ny zavamaniry holatra Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary dia mampiasa paikady misy ambaratonga maro mba hampielezana aretina amin'ny zavamaniry mpampiantrano samihafa. Ity fanadihadiana ity dia manolotra ny fampiasana ny diamine L-ornithine, asidra amine tsy proteinina izay mandrisika ny famokarana asidra amine tena ilaina hafa, ho toy ny paikady fitantanana hafa hanatsarana ny valinteny molekiola, ara-batana ary biochemika an'ny Phaseolus vulgaris L. amin'ny bobongolo fotsy vokatry ny Pseudomonas sclerotiorum. Ny fanandramana in vitro dia naneho fa ny L-ornithine dia nanakana be ny fitomboan'ny mycelium an'ny S. pyrenoidosa amin'ny fomba miankina amin'ny fatra. Ankoatra izany, dia afaka mampihena be ny hamafin'ny bobongolo fotsy amin'ny toe-javatra misy trano maitso. Ankoatra izany, ny L-ornithine dia nandrisika ny fitomboan'ny zavamaniry notsaboina, izay manondro fa ny fifantohana L-ornithine nosedraina dia tsy misy poizina amin'ny zavamaniry notsaboina. Ankoatra izany, ny L-ornithine dia nanatsara ny fanehoana ireo antioksidan tsy anzima (fenolika sy flavonoida mety levona tanteraka) sy ireo antioksidana anzima (catalase (CAT), peroxidase (POX), ary polyphenol oxidase (PPO)), ary nampitombo ny fanehoana ireo fototarazo telo mifandraika amin'ny antioksidana (PvCAT1, PvSOD, ary PvGR). Ankoatra izany, ny fanadihadiana in silico dia naneho ny fisian'ny proteinina oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) ao amin'ny genome S. sclerotiorum, izay tena mitovy amin'ny proteinina oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) an'ny Aspergillus fijiensis (AfOAH) sy Penicillium sp. (PlOAH) raha ny resaka fanadihadiana momba ny fiasa, ny sehatra voatahiry, ary ny topolojia. Mahaliana fa ny fanampiana L-ornithine tamin'ny ron-kena dextrose ovy (PDB) dia nampihena be ny fanehoana ny fototarazo SsOAH ao amin'ny mycelia S. sclerotiorum. Toy izany koa, ny fampiharana ivelany ny L-ornithine dia nampihena be ny fanehoana ny fototarazo SsOAH tao amin'ny mycelium holatra nangonina avy amin'ny zavamaniry notsaboina. Farany, ny fampiharana ny L-ornithine dia nampihena be ny famoahana asidra oksalika tao amin'ny media PDB sy ny ravina voan'ny aretina. Ho fehin-kevitra, ny L-ornithine dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fitazonana ny sata redox ary koa ny fanamafisana ny fiarovan'ny zavamaniry voan'ny aretina. Ny vokatry ny fanadihadiana ity dia mety hanampy amin'ny famolavolana fomba vaovao sy sariaka amin'ny tontolo iainana mba hifehezana ny bobongolo fotsy sy hampihenana ny fiantraikany amin'ny famokarana tsaramaso sy ny voly hafa.
Ny bobongolo fotsy, vokatry ny holatra necrotrophic Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, dia aretina manimba sy mampihena ny vokatra izay mampidi-doza lehibe ho an'ny famokarana tsaramaso manerantany (Phaseolus vulgaris L.) (Bolton et al., 2006). Ny Sclerotinia sclerotiorum dia iray amin'ireo aretina holatra entin'ny tany sarotra indrindra fehezina, miaraka amin'ny karazana zavamaniry mihoatra ny 600 ary ny fahafahana manimba haingana ny sela mpampiantrano amin'ny fomba tsy voafaritra (Liang sy Rollins, 2018). Amin'ny toe-javatra tsy mety, dia mandalo dingana lehibe amin'ny tsingerim-piainany izy, mijanona ho matory mandritra ny fotoana maharitra toy ny rafitra mainty, mafy, toy ny voa antsoina hoe 'sclerotia' ao anaty tany na toy ny fitomboana fotsy sy malefaka ao amin'ny mycelium na ny vatan'ny zavamaniry voan'ny aretina (Schwartz et al., 2005). Afaka mamorona sclerotia ny S. sclerotiorum, izay ahafahany miaina any amin'ny saha voan'ny aretina mandritra ny fotoana maharitra ary maharitra mandritra ny aretina (Schwartz et al., 2005). Manankarena otrikaina ny Sclerotia, afaka maharitra ao anaty tany mandritra ny fotoana maharitra, ary miasa ho toy ny vaksiny voalohany amin'ny aretina manaraka (Schwartz et al., 2005). Amin'ny toe-javatra tsara, mitsimoka ny sclerotia ary mamokatra spores eny amin'ny rivotra izay afaka mamindra ny faritra rehetra ambonin'ny tany amin'ny zavamaniry, anisan'izany fa tsy voafetra amin'ny voninkazo, tahony, na voany (Schwartz et al., 2005).
Mampiasa paikady misy ambaratonga maro ny Sclerotinia sclerotiorum mba hampifindrana aretina amin'ny zavamaniry mpampiantrano azy, izay ahitana andiana hetsika mirindra manomboka amin'ny fitsimohan'ny sclerotial ka hatramin'ny fivoaran'ny soritr'aretina. Amin'ny voalohany, ny S. sclerotiorum dia mamokatra spores mihantona (antsoina hoe ascospores) avy amin'ny rafitra mitovy amin'ny holatra antsoina hoe apothecia, izay miparitaka eny amin'ny rivotra ary mivoatra ho sclerotia tsy mihetsika amin'ny poti-javamaniry voan'ny aretina (Bolton et al., 2006). Avy eo ny holatra dia mamoaka asidra oksalika, singa virulence, mba hifehezana ny pH amin'ny rindrin'ny sela zavamaniry, hampiroborobo ny fahasimban'ny anzima sy ny fidiran'ny sela (Hegedus sy Rimmer, 2005), ary hanakana ny fipoahan'ny oxidative amin'ny zavamaniry mpampiantrano. Io dingana asidra io dia mampihena ny rindrin'ny sela zavamaniry, manome tontolo tsara ho an'ny fiasan'ny anzima manimba ny rindrin'ny sela holatra (CWDEs), mamela ny pathogen handresy ny sakana ara-batana ary hiditra ao amin'ny sela mpampiantrano (Marciano et al., 1983). Rehefa tafiditra ao anatin'ny vatana ny S. sclerotiorum dia mamoaka CWDE maromaro, toy ny polygalacturonase sy cellulase, izay manamora ny fiparitahany ao amin'ny sela voan'ny aretina ary miteraka nekrose amin'ny sela. Ny fivoaran'ny lesoka sy ny tsihy hyphae dia mitarika amin'ny soritr'aretina mampiavaka ny bobongolo fotsy (Hegedus sy Rimmer, 2005). Mandritra izany fotoana izany, ny zavamaniry mpampiantrano dia mamantatra ny lamina molekiola mifandraika amin'ny pathogen (PAMPs) amin'ny alàlan'ny receptors recognition pattern (PRRs), ka miteraka andiana hetsika famantarana izay amin'ny farany dia mampihetsika ny valin-kafatra fiarovana.
Na dia eo aza ny ezaka am-polony taona maro natao hifehezana ny aretina, dia mbola tsy ampy ny plasma mikraoba mahatohitra sahaza amin'ny tsaramaso, toy ny amin'ny voly ara-barotra hafa, noho ny fanoherana, ny fahavelomana ary ny fahafahan'ny pathogen mifanaraka amin'ny toe-javatra. Noho izany, tena sarotra ny fitantanana ny aretina ary mitaky paikady mitambatra sy maro lafy izay ahitana fitambaran'ny fomba fanao ara-kolontsaina, ny fanaraha-maso biolojika ary ny famonoana bibikely simika (O'Sullivan et al., 2021). Ny fanaraha-maso simika ny bobongolo fotsy no mahomby indrindra satria ny famonoana bibikely, rehefa ampiharina araka ny tokony ho izy sy amin'ny fotoana mety, dia afaka mifehy tsara ny fihanaky ny aretina, mampihena ny hamafin'ny aretina ary mampihena ny fatiantoka vokatra. Na izany aza, ny fampiasana tafahoatra sy ny fiankinan-doha tafahoatra amin'ny famonoana bibikely dia mety hitarika amin'ny fipoiran'ny karazana S. sclerotiorum mahatohitra ary misy fiantraikany ratsy amin'ny zavamananaina tsy lasibatra, ny fahasalaman'ny tany ary ny kalitaon'ny rano (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024). Noho izany, ny fitadiavana safidy hafa sariaka amin'ny tontolo iainana dia lasa laharam-pahamehana.
Ny polyamines (PAs), toy ny putrescine, spermidine, spermine, ary cadaverine, dia afaka miasa ho safidy mampanantena amin'ny fisorohana ny aretina azo avy amin'ny zavamaniry entin'ny tany, ka mampihena tanteraka na amin'ny ampahany ny fampiasana fungicides simika mampidi-doza (Nehela et al., 2024; Yi et al., 2024). Amin'ny zavamaniry ambony kokoa, ny PAs dia mandray anjara amin'ny dingana ara-batana maro, anisan'izany, fa tsy voafetra amin'ny, fizarazarana sela, ny fiovan'ny sela, ary ny fiatrehana ny adin-tsaina abiotika sy biotika (Killiny sy Nehela, 2020). Afaka miasa ho toy ny antioksidan izy ireo, manampy amin'ny fanesorana ireo karazana oksizenina mihetsika (ROS), mitazona ny homeostasis redox (Nehela sy Killiny, 2023), mampirisika ny fototarazo mifandraika amin'ny fiarovana (Romero et al., 2018), mandrindra ny lalan'ny metabolika isan-karazany (Nehela sy Killiny, 2023), manova ny phytohormones endogenous (Nehela sy Killiny, 2019), mametraka fanoherana systemic acquired (SAR), ary mandrindra ny fifandraisan'ny zavamaniry sy ny pathogen (Nehela sy Killiny, 2020; Asija et al., 2022; Czerwoniec, 2022). Tsara homarihina fa miovaova arakaraka ny karazana zavamaniry, ny pathogens ary ny toe-javatra manodidina ny fomba fiasa sy ny anjara asan'ny PA amin'ny fiarovana ny zavamaniry ny fomba fiasa manokana sy ny anjara asan'ny PA amin'ny fiarovana ny zavamaniry. Ny PA be dia be indrindra amin'ny zavamaniry dia biosynthesized avy amin'ny polyamine L-ornithine tena ilaina (Killiny sy Nehela, 2020).
Mitana anjara toerana maro amin'ny fitomboan'ny zavamaniry sy ny fivoarany ny L-ornithine. Ohatra, ireo fanadihadiana teo aloha dia naneho fa amin'ny vary (Oryza sativa), ny ornithine dia mety mifandray amin'ny fanodinana azota (Liu et al., 2018), ny vokatra vary, ny kalitao sy ny hanitra (Lu et al., 2020), ary ny fiatrehana ny fihenjanana amin'ny rano (Yang et al., 2000). Ankoatra izany, ny fampiharana ny L-ornithine avy any ivelany dia nanatsara be ny fandeferana ny hain-tany amin'ny betiravy siramamy (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) ary nampihena ny fihenjanana amin'ny sira amin'ny tongolo (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu sy Çavuşoǧlu, 2021) ary ny zavamaniry cashew (Anacardium occidentale) (da Rocha et al., 2012). Ny mety ho anjara asan'ny L-ornithine amin'ny fiarovana amin'ny fihenjanana abiotika dia mety ho vokatry ny fandraisany anjara amin'ny fanangonan'ny proline amin'ny zavamaniry voatsabo. Ohatra, ireo fototarazo mifandraika amin'ny metabolisman'ny proline, toy ny fototarazo ornithine delta aminotransferase (delta-OAT) sy ny fototarazo proline dehydrogenase (ProDH1 sy ProDH2), dia efa voalaza fa tafiditra amin'ny fiarovana ny Nicotiana benthamiana sy Arabidopsis thaliana amin'ny karazana Pseudomonas syringae tsy mpampiantrano (Senthil-Kumar sy Mysore, 2012). Etsy ankilany, ny fungal ornithine decarboxylase (ODC) dia ilaina amin'ny fitomboan'ny pathogen (Singh et al., 2020). Ny fikendrena ny ODC an'ny Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici amin'ny alàlan'ny host-induced gene silencing (HIGS) dia nanamafy be ny fanoheran'ny zavamaniry voatabia amin'ny Fusarium wilt (Singh et al., 2020). Na izany aza, ny mety ho anjara asan'ny fampiharana ornithine exogenous amin'ny adin-tsaina biotic toy ny phytopathogens dia mbola tsy nodinihina tsara. Ny tena zava-dehibe kokoa dia ny mbola tsy voadinika betsaka ny fiantraikan'ny ornithine amin'ny fanoherana ny aretina sy ny trangan-javatra biochemika sy fiziolojika mifandraika amin'izany.
Zava-dehibe ny fahatakarana ny fahasarotan'ny aretina S. sclerotiorum amin'ny legioma mba hampivelarana paikady fanaraha-maso mahomby. Ato amin'ity fanadihadiana ity, dia mikendry ny hamantatra ny mety ho anjara asan'ny diamine L-ornithine ho toy ny singa fototra amin'ny fanamafisana ny rafitra fiarovana sy ny fanoheran'ny zavamaniry legioma amin'ny aretina Sclerotinia sclerotiorum izahay. Mihevitra izahay fa, ankoatra ny fanamafisana ny valin-tenin'ny fiarovana amin'ny zavamaniry voan'ny aretina, ny L-ornithine dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fitazonana ny toetry ny redox. Manolo-kevitra izahay fa ny mety ho fiantraikan'ny L-ornithine dia mifandraika amin'ny fanaraha-maso ny rafitra fiarovana antioxidant anzima sy tsy anzima ary ny fitsabahana amin'ny anton-javatra pathogenicity/virulence fungal sy ny proteinina mifandraika amin'izany. Io fiasa roa sosona an'ny L-ornithine io dia mahatonga azy io ho kandidà mampanantena ho an'ny paikady maharitra hampihenana ny fiantraikan'ny bobongolo fotsy sy hampitombo ny fanoheran'ny voly legioma mahazatra amin'ity pathogen fungal mahery vaika ity. Ny vokatry ny fanadihadiana ankehitriny dia mety hanampy amin'ny fampivoarana fomba vaovao sy sariaka amin'ny tontolo iainana hifehezana ny bobongolo fotsy sy hampihena ny fiantraikany amin'ny famokarana legioma.
Ato amin'ity fandalinana ity, karazana tsaramaso mahazatra mora voan'ny aretina, Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3), no nampiasaina ho fitaovana fanandramana. Nomen'ny Departemantan'ny Fikarohana momba ny Legume, Ivontoerana Fikarohana momba ny Voankazo eny an-tsaha (FCRI), Foibe Fikarohana momba ny Fambolena (ARC), Ejipta tamim-pitiavana ireo voa salama. Voa dimy no nafafy tao anaty vilany plastika (savaivony anatiny 35 sm, halaliny 50 sm) feno tany voan'ny S. sclerotiorum tao anaty toe-javatra misy trano maitso (25 ± 2 °C, hamandoana 75 ± 1%, 8 ora mazava/16 ora maizina). 7–10 andro aorian'ny famafazana (DPS), dia nohafohezina ireo zana-kazo mba hamelana zana-kazo roa mitovy fitomboana sy ravina telo mivelatra tanteraka ao anaty vilany tsirairay. Ny zavamaniry rehetra ao anaty vilany dia notondrahana indray mandeha isaky ny roa herinandro ary nomena zezika isam-bolana amin'ny tahan'ny atolotra ho an'ny karazany nomena.
Mba hanomanana fifantohana 500 mg/L amin'ny L-ornithinediamine (fantatra ihany koa amin'ny hoe (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic acid; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Alemaina), dia natsonika tao anaty rano madio 100 mL ny 50 mg. Avy eo dia nohamainina ny vahaolana ary nampiasaina tamin'ny andrana manaraka. Raha fintinina, andiana fifantohana L-ornithine enina (12.5, 25, 50, 75, 100, ary 125 mg/L) no notsapaina in vitro. Ankoatra izany, rano madio madio no nampiasaina ho fanaraha-maso ratsy (Mock) ary ny vovoka azo lena 50% amin'ny fungicide ara-barotra "Rizolex-T" (toclofos-methyl 20% + thiram 30%; KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zayat, Gharbia Governorate, Ejipta) no nampiasaina ho fanaraha-maso tsara. Notsapaina in vitro tamin'ny fifantohana dimy (2, 4, 6, 8 ary 10 mg/L) ny fanafody famonoana bibikely ara-barotra "Rizolex-T".
Santionany amin'ny tahon'ny tsaramaso sy ny hodiny izay mampiseho soritr'aretina mahazatra amin'ny bobongolo fotsy (tahan'ny fihanaky ny aretina: 10–30%) no nangonina avy amin'ny toeram-pambolena ara-barotra. Na dia fantatra araka ny karazany/karazana aza ny ankamaroan'ny zavamaniry voan'ny aretina (karazana ara-barotra mora voan'ny aretina Giza 3), ny hafa kosa, indrindra fa ireo azo avy amin'ny tsena eo an-toerana, dia tsy fantatra ny karazany. Ny akora voan'ny aretina voangona dia nodiovina tamin'ny vahaolana sodium hypochlorite 0.5% nandritra ny 3 minitra, avy eo nosasana imbetsaka tamin'ny rano madio madio ary nofafana maina tamin'ny taratasy sivana madio mba hanesorana ny rano be loatra. Avy eo dia notapatapahina ho sombintsombiny kely avy amin'ny sela afovoany (eo anelanelan'ny sela salama sy voan'ny aretina) ireo taova voan'ny aretina, novolena tamin'ny dextrose agar ovy (PDA) ary notehirizina tamin'ny 25 ± 2 °C miaraka amin'ny tsingerin'ny hazavana 12 ora/maizina 12 ora mandritra ny 5 andro mba hamporisihana ny fiforonan'ny sclerotia. Ny fomba tendron'ny mycelium dia nampiasaina ihany koa mba hanadiovana ireo holatra avy amin'ny kolontsaina mifangaro na voaloto. Ny holatra voadio dia fantatra voalohany mifototra amin'ny toetrany ara-morfolojika ary avy eo dia nohamafisina fa S. sclerotiorum mifototra amin'ny endri-javatra mikroskopika. Farany, nosedraina ny maha-marary azy ireo karazana tsaramaso tsotra mora voan'ny aretina Giza 3 ireo karazana voadio rehetra mba hanarahana ny postulate Koch.
Ankoatra izany, ny S. sclerotiorum isolate manafika indrindra (isolate #3) dia nohamafisina bebe kokoa mifototra amin'ny fandaharana anatiny (ITS) araka ny voalazan'i White et al., 1990; Baturo-Ciesniewska et al., 2017. Raha fintinina, dia novolena tao anaty ron-kena dextrose ovy (PDB) ireo isolates ary notehirizina tamin'ny 25 ± 2 °C nandritra ny 5–7 andro. Avy eo dia nangonina ny mycelium holatra, nosivanina tamin'ny lamba fromazy, nosasana indroa tamin'ny rano madio, ary nohamainina tamin'ny taratasy sivana madio. Ny ADN genomic dia nosarahina tamin'ny fampiasana ny Quick-DNA™ Fungal/Bacterial Miniprep Kit (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah et al., 2022, 2024). Nohamafisina avy eo ny faritra ITS rDNA tamin'ny fampiasana ny mpivady primer manokana ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; habe andrasana: 540 bp) (Baturo-Ciesniewska et al., 2017). Natolotra ho an'ny filaharana (Beijing Aoke Dingsheng Biotechnology Co., Ltd.) ireo vokatra PCR voadio. Nozaraina roa sosona ireo filaharana ITS rDNA tamin'ny fampiasana ny fomba filaharana Sanger. Avy eo dia nampitahaina tamin'ny angon-drakitra farany tao amin'ny GenBank sy ny Foibe Nasionaly ho an'ny Fampahalalana momba ny Bioteknolojia (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) ireo filaharana fangatahana nangonina tamin'ny fampiasana ny rindrambaiko BLASTn. Nampitahaina tamin'ny karazana/isolates S. sclerotiorum 20 hafa nalaina avy amin'ny angon-drakitra farany tao amin'ny NCBI GenBank (Tabilao Fanampiny S1) ny filaharana fangatahana tamin'ny fampiasana ny ClustalW ao amin'ny Fonosana Famakafakana Genetika Evolisiona Molekiola (MEGA-11; dikan-teny 11) (Kumar et al., 2024). Natao tamin'ny alalan'ny fomba mety indrindra sy ny modely ankapobeny amin'ny fanoloana nucleotide azo averina amin'ny fotoana (Nei sy Kumar, 2000) ny fanadihadiana momba ny evolisiona. Aseho eto ny hazo manana ny mety ho log ambony indrindra. Ny hazo voalohany ho an'ny fikarohana heuristic dia voafantina amin'ny alàlan'ny fisafidianana ny hazo manana ny mety ho log ambony indrindra eo anelanelan'ny hazo mifanakaiky (NJ) (Kumar et al., 2024) sy ny hazo parsimony ambony indrindra (MP). Ny hazo NJ dia naorina tamin'ny alalan'ny matrice distance pairwise kajy mampiasa ny modely ankapobeny amin'ny mety ho time reversible (Nei sy Kumar, 2000).
Ny fiasan'ny L-ornithine sy ny bakteria "Rizolex-T" amin'ny famonoana bakteria dia voafaritra in vitro tamin'ny alàlan'ny fomba fanaparitahana agar. Fomba: Makà vahaolana L-ornithine (500 mg/L) amin'ny habetsahana sahaza ary afangaro tsara amin'ny 10 ml amin'ny akora otrikaina PDA mba hanomanana vahaolana miaraka amin'ny fifantohana farany 12.5, 25, 50, 75, 100 ary 125 mg/L. Fifantohana dimy amin'ny fungicide "Rizolex-T" (2, 4, 6, 8 ary 10 mg/L) sy rano voadio no nampiasaina ho fanaraha-maso. Rehefa nivaingana ny akora, dia nafindra teo afovoan'ny lovia Petri ny mycelium vao avy nomanina avy amin'ny kolontsaina Sclerotinia sclerotiorum, 4 mm ny savaivony, ary nokolokoloina tamin'ny 25±2°C mandra-pandrakofan'ny mycelium ny lovia Petri fanaraha-maso manontolo, ary avy eo dia voarakitra ny fitomboan'ny holatra. Kajy ny isan-jaton'ny fisakanana ny fitomboan'ny radial an'ny S. sclerotiorum amin'ny fampiasana ny equation 1:
Naverina indroa ny fanandramana, miaraka amin'ny dika mitovy biolojika enina ho an'ny vondrona fanaraha-maso/fanandramana tsirairay ary vilany dimy (zavamaniry roa isaky ny vilany) ho an'ny dika mitovy biolojika tsirairay. Nohadihadiana indroa (dika mitovy ara-teknika roa) ny dika mitovy biolojika tsirairay mba hahazoana antoka ny fahamarinan'ny vokatra azo avy amin'ny fanandramana, ny fahatokisana ary ny fahafaha-mamerina azy. Ankoatra izany, nampiasaina ny fanadihadiana momba ny regression probit mba hikajiana ny fifantohana manakana antsasaky ny ambony indrindra (IC50) sy ny IC99 (Prentice, 1976).
Mba hanombanana ny mety ho vitan'ny L-ornithine ao anatin'ny toe-javatra misy trano maitso, dia nisy andrana roa nifanesy natao tao anaty vilany. Raha fintinina, dia nofenoina tany fasika sy tanimanga efa nodiovina (3:1) ny vilany ary novolena tamin'ny kolontsaina vao avy nomanina avy amin'ny S. sclerotiorum. Voalohany, ny S. sclerotiorum (isolate #3) izay tena manafika indrindra dia novolena tamin'ny alalan'ny fanapahana sclerotium iray ho roa, fametrahana azy mihohoka amin'ny PDA ary fanendasana amin'ny 25°C ao anaty haizina tsy tapaka (24 ora) mandritra ny 4 andro mba hamporisihana ny fitomboan'ny mycelium. Avy eo dia nalaina avy amin'ny sisiny voalohany ny agar-agar efatra mirefy 5 mm ny savaivony ary novolena tamin'ny 100 g fangaro varimbazaha sy vary tsy nodiovina (1:1, v/v) ary ny tavoahangy rehetra dia novolena tamin'ny 25 ± 2 °C tao anatin'ny tsingerin'ny hazavana 12 ora/maizina 12 ora mandritra ny 5 andro mba hamporisihana ny fiforonan'ny sclerotia. Afangaro tsara ny ao anatin'ny tavoahangy rehetra mba hahazoana antoka fa mitovy tsara alohan'ny hanampiana tany. Avy eo, nampiana 100 g ny fangaroan'ny vary orza tao anaty vilany tsirairay mba hahazoana antoka fa tsy miova ny fifantohan'ny otrikaretina. Notondrahana rano ireo vilany notsindronina mba hampavitrika ny fitomboan'ny holatra ary napetraka tao anaty trano maitso nandritra ny 7 andro.
Avy eo dia nafafy tao anaty vilany tsirairay ny voa dimy avy amin'ny karazana Giza 3. Ho an'ireo vilany notsaboina tamin'ny L-ornithine sy ny fungisida Rizolex-T, ireo voa efa nodiovina dia nalona nandritra ny adiny roa tao anaty rano misy ireo akora roa miaraka amin'ny fifantohana IC99 farany eo amin'ny 250 mg/L sy 50 mg/L, tsirairay avy, ary avy eo dia nohamainina nandritra ny adiny iray talohan'ny namafazana. Etsy ankilany, ireo voa dia nalona tao anaty rano madio madio ho toy ny fanaraha-maso ratsy. Rehefa afaka 10 andro, talohan'ny fanondrahana voalohany, dia nohafohezina ireo zana-kazo, ka namela zana-kazo roa madio tao anaty vilany tsirairay. Fanampin'izany, mba hahazoana antoka fa voan'ny S. sclerotiorum, dia notapatapahina tamin'ny toerana roa samy hafa ny tahon'ny tsaramaso mitovy dingana fivoarana (10 andro) tamin'ny fampiasana antsy efa nodiovina ary napetraka tao anaty ratra tsirairay ny 0.5 g eo ho eo amin'ny fangaroan'ny bran, narahin'ny hamandoana avo mba hamporisihana ny aretina sy ny fivoaran'ny aretina amin'ny zavamaniry rehetra notsindronina. Norarahana toy izany koa ireo zavamaniry fanaraha-maso ary napetraka tao anaty ratra ny fangaroan'ny vary tsy voahodina sy tsy mbola voakolokolo mitovy fatra (0.5 g) ary notehirizina tao anaty hamandoana avo mba hanahafana ny tontolo iainana mety hisian'ny fivoaran'ny aretina sy hahazoana antoka ny fitoviana eo amin'ireo vondrona fitsaboana.
Fomba fitsaboana: Notondrahana rano tamin'ny rano L-ornithine (250 mg/l) 500 ml na ny fungisida Rizolex-T (50 mg/l) ireo zana-tsaramaso tamin'ny alalan'ny fanondrahana ny tany, avy eo dia naverina intelo ny fitsaboana, isaky ny 10 andro. Ireo zana-tsaramaso izay nomena placebo dia notondrahana rano madio 500 ml. Ny fitsaboana rehetra dia natao tao anaty trano maitso (25 ± 2°C, hamandoana 75 ± 1%, ary fotoana maharitra 8 ora mazava/maizina 16 ora). Notondrahana rano isaky ny tapa-bolana ny vilany rehetra ary notsaboina isam-bolana tamin'ny zezika NPK voalanjalanja (20-20-20, misy solifara 3.6% sy singa bitika TE; Zain Seeds, Ejipta) tamin'ny fifantohana 3–4 g/l tamin'ny alalan'ny famafazana ravina araka ny tolo-kevitra ho an'ny karazany manokana sy ny torolalan'ny mpanamboatra. Raha tsy misy voalaza manokana, dia nangonina avy amin'ny dika mitovy biolojika tsirairay ireo ravina efa lehibe tanteraka (ravina faha-2 sy faha-3 avy any ambony) 72 ora taorian'ny fitsaboana (hpt), natambatra, natambatra ary notehirizina tamin'ny -80 °C ho an'ny fanadihadiana fanampiny, anisan'izany, fa tsy voafetra amin'ny, ny toerana misy ny famantarana ny adin-tsaina oksidativa, ny peroksidasiônan'ny lipida, ny antioksidan anzima sy tsy anzima ary ny fanehoana ny fototarazo.
Nojerena isan-kerinandro ny hamafin'ny aretina bobongolo fotsy 21 andro taorian'ny tsindrona (dpi) tamin'ny fampiasana maridrefy 1–9 (Tabilao Fanampiny S2) mifototra amin'ny maridrefy Petzoldt sy Dickson (1996) novain'i Teran et al. (2006). Raha fintinina, nojerena ny tahony sy ny sampan'ny tsaramaso nanomboka tamin'ny toerana tsindrona mba hanarahana ny fivoaran'ny fery manaraka ny internodes sy nodes. Avy eo dia norefesina ny halaviran'ny fery manomboka amin'ny toerana tsindrona ka hatramin'ny teboka lavitra indrindra manaraka ny tahony na ny sampana ary nomena isa 1–9 mifototra amin'ny toerana misy ny fery, izay (1) nanondro fa tsy misy aretina hita maso akaikin'ny toerana tsindrona ary (2–9) nanondro fitomboana miandalana amin'ny haben'ny fery sy ny fivoarany manaraka ny nodes/internodes (Tabilao Fanampiny S2). Avy eo dia novaina ho isan-jato ny hamafin'ny aretina bobongolo fotsy amin'ny fampiasana ny raikipohy 2:
Ankoatra izany, ny velarana eo ambanin'ny fiolahana fivoaran'ny aretina (AUDPC) dia nokajiana tamin'ny fampiasana ny raikipohy (Shaner sy Finney, 1977), izay vao haingana no namboarina ho an'ny lo fotsy amin'ny tsaramaso mahazatra (Chauhan et al., 2020) amin'ny fampiasana ny equation 3:
Izay Yi = hamafin'ny aretina amin'ny fotoana ti, Yi+1 = hamafin'ny aretina amin'ny fotoana manaraka ti+1, ti = fotoana fandrefesana voalohany (amin'ny andro), ti+1 = fotoana fandrefesana manaraka (amin'ny andro), n = isan'ny teboka fandinihana na fotoana fandinihana manontolo. Noraisina isan-kerinandro nandritra ny 21 andro tao amin'ny dika mitovy biolojika rehetra ny masontsivana fitomboan'ny tsaramaso, anisan'izany ny haavon'ny zavamaniry (sm), ny isan'ny sampana isaky ny zavamaniry, ary ny isan'ny ravina isaky ny zavamaniry.
Tao amin'ny famerenana biolojika tsirairay, dia nangonina ny santionan'ny ravina (ravina faharoa sy fahatelo efa mivelatra tanteraka avy any ambony) tamin'ny andro faha-45 taorian'ny fitsaboana (15 andro taorian'ny fitsaboana farany). Ny famerenana biolojika tsirairay dia nisy vilany dimy (zavamaniry roa isaky ny vilany). Tokony ho 500 mg amin'ny sela voatoto no nampiasaina tamin'ny fanesorana ireo loko fotosintetika (klorofila a, klorofila b ary karotenoida) tamin'ny fampiasana acétone 80% tamin'ny 4 °C tao anaty haizina. Rehefa afaka 24 ora, dia notsindrina ireo santionany ary nangonina ny ranoka mba hamaritana ny votoatin'ny klorofila a, klorofila b ary karotenoida amin'ny fomba kolorimetrika amin'ny fampiasana spectrophotometer UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) araka ny fomba (Lichtenthaler, 1987) amin'ny fandrefesana ny absorbance amin'ny halavan'ny onjam-peo telo samihafa (A470, A646 ary A663 nm). Farany, ny votoatin'ny loko fotosintetika dia nokajiana tamin'ny fampiasana ireto raikipohy manaraka ireto 4–6 nohazavain'i Lichtenthaler (1987).
Rehefa afaka 72 ora taorian'ny fitsaboana (hpt), dia nangonina avy amin'ny dika mitovy biolojika tsirairay ny ravina (ravina faharoa sy fahatelo efa mivelatra tanteraka avy any ambony) mba hahitana ny toerana misy ny peroxyde hydrogène (H2O2) sy ny anion superoxide (O2•−) ao amin'ny sela biolojika tsirairay. Ny dika mitovy biolojika tsirairay dia nisy vilany dimy (zavamaniry roa isaky ny vilany). Nohadihadiana indroa (dika mitovy ara-teknika roa) ny dika mitovy biolojika tsirairay mba hahazoana antoka ny fahamarinan'ny fomba, ny fahatokisana ary ny fahafaha-mamerina azy. Ny H2O2 sy O2•− dia voafaritra tamin'ny fampiasana 0.1% 3,3′-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Alemaina) na nitroblue tetrazolium (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Alemaina), tsirairay avy, manaraka ny fomba nohazavain'i Romero-Puertas et al. (2004) sy Adam et al. (1989) miaraka amin'ny fanovana kely. Ho an'ny toerana misy ny H2O2 ao amin'ny vatana, dia nampidirina tao anaty hazavana 0.1% DAB tao anaty 10 mM Tris buffer (pH 7.8) ireo takelaka kely ary avy eo notehirizina tao anaty hazavana nandritra ny 60 minitra tamin'ny mari-pana ao an-trano. Nofotsiana tao anaty TCA 0.15% (v/v) tao anaty 4:1 (v/v) ethanol:chloroform (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Ejipta) ireo takelaka kely ary avy eo naseho tamin'ny hazavana mandra-pahamaizin'izy ireo. Toy izany koa, nampidirina tao anaty hazavana 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.8) misy 0.1 w/v % HBT ireo valva mba ho toerana misy ny O2•− ao amin'ny vatana. Notehirizina tao anaty hazavana nandritra ny 20 minitra tamin'ny mari-pana ao an-trano ireo takelaka kely, avy eo nofotsiana toy ny etsy ambony, ary avy eo nohazavaina mandra-pipoiran'ny teboka manga/volomparasy maizina. Notombanana tamin'ny fampiasana ny dikan-teny Fiji an'ny fonosana fanodinana sary ImageJ (http://fiji.sc; nojerena tamin'ny 7 Martsa 2024) ny hamafin'ny loko volontany (ho toy ny mari-pamantarana H2O2) na manga-volomparasy (ho toy ny mari-pamantarana O2•−) vokatr'izany.
Ny malondialdehyde (MDA; ho mariky ny peroksidasiônan'ny lipida) dia voafaritra araka ny fomba fiasan'i Du sy Bramlage (1992) miaraka amin'ny fanovana kely. Ny ravina avy amin'ny dika mitovy biolojika tsirairay (ravina faharoa sy fahatelo mivelatra tanteraka avy any ambony) dia nangonina 72 ora taorian'ny fitsaboana (hpt). Ny dika mitovy biolojika tsirairay dia nahitana vilany dimy (zavamaniry roa isaky ny vilany). Ny dika mitovy biolojika tsirairay dia nodinihina indroa (dika mitovy ara-teknika roa) mba hahazoana antoka ny fahamarinan'ny fomba, ny fahatokisana ary ny fahafaha-mamerina azy. Raha fintinina, 0.5 g ny sela ravina voatoto no nampiasaina tamin'ny fitrandrahana MDA miaraka amin'ny asidra trichloroacetic 20% (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, Etazonia) misy butylated hydroxytoluene 0.01% (BHT; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia). Avy eo dia voafaritra tamin'ny alalan'ny loko ny votoatin'ny MDA tao amin'ny supernatant tamin'ny fandrefesana ny absorbance tamin'ny 532 sy 600 nm tamin'ny fampiasana spectrophotometer UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon) ary avy eo dia aseho amin'ny nmol g−1 FW.
Ho fanombanana ny antioksidan tsy misy anzima sy anzima, dia nangonina avy amin'ny dika mitovy biolojika tsirairay ny ravina (ravina faharoa sy fahatelo efa mivelatra tanteraka avy any ambony) 72 ora aorian'ny fitsaboana (hpt). Ny dika mitovy biolojika tsirairay dia nisy vilany dimy (zavamaniry roa isaky ny vilany). Nohadihadiana indroa ny santionany biolojika tsirairay (santionany ara-teknika roa). Nototoina tamin'ny azota ranoka ny ravina roa ary nampiasaina mivantana hamaritana ny antioksidan misy anzima sy tsy misy anzima, ny asidra amine manontolo, ny votoatin'ny proline, ny fanehoan-kevitry ny fototarazo, ary ny fandrefesana ny oxalate.
Ny totalin'ny phenolics mety levona dia voafaritra tamin'ny fampiasana ny reagent Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia) miaraka amin'ny fanovana kely amin'ny fomba voalazan'i Kahkonen et al. (1999). Raha fintinina, eo amin'ny 0.1 g eo ho eo ny sela ravina homogenized no nalaina tamin'ny 20 ml methanol 80% tao anaty haizina nandritra ny 24 ora ary ny supernatant dia nangonina taorian'ny centrifugation. Ny 0.1 ml amin'ny nalaina santionany dia nafangaro tamin'ny reagent Folin-Ciocalteu 0.5 ml (10%), nohozongozonina nandritra ny 30 segondra ary navela tao anaty haizina nandritra ny 5 minitra. Avy eo dia nampiana 0.5 ml ny vahaolana sodium carbonate 20% (Na2CO3; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies Company, Cairo, Ejipta) tao anaty fantsona tsirairay, nafangaro tsara ary notehirizina tamin'ny mari-pana ao an-trano tao anaty haizina nandritra ny 1 ora. Taorian'ny fandoroana, dia norefesina tamin'ny 765 nm ny fidiran'ny fangaroan'ny fihetsiketsehana tamin'ny fampiasana spektrofotometatra UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon). Ny fifantohan'ny fenol mety levona rehetra ao amin'ny nalaina santionany dia voafaritra tamin'ny fampiasana fiolahana fanamarinana asidra gallika (Fisher Scientific, Hampton, NH, Etazonia) ary aseho amin'ny miligrama mitovy amin'ny asidra gallika isaky ny grama amin'ny lanja vaovao (mg GAE g-1 lanja vaovao).
Ny votoatin'ny flavonoida mety levona manontolo dia voafaritra araka ny fomba fiasan'i Djeridane et al. (2006) miaraka amin'ny fanovana kely. Raha fintinina, ny 0.3 ml amin'ny fitrandrahana methanol etsy ambony dia nafangaro tamin'ny 0.3 ml amin'ny vahaolana aluminium klôro 5% (AlCl3; Fisher Scientific, Hampton, NH, Etazonia), nafangaro mafy ary avy eo notehirizina tamin'ny mari-pana efitrano nandritra ny 5 minitra, narahin'ny fanampiana vahaolana potassium acetate 10% 0.3 ml (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Ejipta), nafangaro tsara ary notehirizina tamin'ny mari-pana efitrano nandritra ny 30 minitra tao anaty haizina. Taorian'ny fanetezam-boaloboka, ny fidiran'ny fangaroan'ny fihetsika dia norefesina tamin'ny 430 nm tamin'ny fampiasana spectrophotometer UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon). Ny fifantohana ny flavonoida mety levona manontolo ao amin'ny fitrandrahana santionany dia voafaritra tamin'ny fampiasana curve calibration rutin (TCI America, Portland, OR, Etazonia) ary avy eo dia aseho amin'ny miligrama mitovy amin'ny rutin isaky ny grama amin'ny lanja vaovao (mg RE g-1 lanja vaovao).
Ny votoatin'ny asidra amine afaka manontolo ao amin'ny ravin'ny tsaramaso dia voafaritra tamin'ny fampiasana reagent ninhydrin novaina (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, Etazonia) mifototra amin'ny fomba naroson'i Yokoyama sy Hiramatsu (2003) ary novain'i Sun et al. (2006). Raha fintinina, 0.1 g ny sela voatoto dia nalaina tamin'ny buffer pH 5.4, ary 200 μL ny supernatant dia nampifangaroina tamin'ny 200 μL ninhydrin (2%) sy 200 μL pyridine (10%; Spectrum Chemical, New Brunswick, NJ, Etazonia), notehirizina tao anaty rano mangotraka nandritra ny 30 minitra, avy eo dia nangatsiaka sy norefesina tamin'ny 580 nm tamin'ny fampiasana spectrophotometer UV-160A (Shimadzu Corporation, Japon). Etsy ankilany, ny proline dia voafaritra tamin'ny fomba Bates (Bates et al., 1973). Nalaina tamin'ny asidra sulfosalicylic 3% (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, Etazonia) ny proline ary rehefa avy nozairina tamin'ny centrifugation, dia nafangaro tamin'ny asidra acetic glacial 1 ml (Fisher Scientific, Hampton, NH, Etazonia) sy ny reagent ninhydrin ny 0.5 ml tamin'ny supernatant, notehirizina tamin'ny 90°C nandritra ny 45 minitra, nangatsiaka ary norefesina tamin'ny 520 nm tamin'ny fampiasana spectrophotometer mitovy amin'ny etsy ambony. Ny asidra amine maimaim-poana manontolo sy ny proline ao amin'ny nalaina tamin'ny ravina dia voafaritra tamin'ny fampiasana ny glycine sy ny proline calibration curve (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Etazonia), tsirairay avy, ary aseho amin'ny mg/g lanja vaovao.
Mba hamaritana ny fiasan'ny anzima amin'ny anzima antioxidant, dia nalaina tamin'ny 3 ml ny 50 mM Tris buffer (pH 7.8) misy 1 mM EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia) sy 7.5% polyvinylpyrrolidone (PVP; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia) ny sela homogenized eo amin'ny 500 mg eo ho eo, nosarahana tamin'ny centrifuge tamin'ny 10,000 × g nandritra ny 20 minitra tao anaty vata fampangatsiahana (4 °C), ary nangonina ny supernatant (extrait de enzyme crude) (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). Avy eo dia nampiarahina tamin'ny 2 ml ny sodium phosphate buffer 0.1 M (pH 6.5; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Etazonia) sy 100 μl ny vahaolana H2O2 269 mM 100 μl mba hamaritana ny asany anzima araka ny fomban'i Aebi (1984) miaraka amin'ny fanovana kely (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). Ny asan'ny anzima guaiacol-dependent peroxidase (POX) dia voafaritra tamin'ny fampiasana ny fomban'i Harrach et al. (2009). (2008) miaraka amin'ny fanovana kely (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023) ary ny fiasan'ny anzima an'ny polyphenol oxidase (PPO) dia voafaritra taorian'ny fihetsika tamin'ny 2.2 ml ny sodium phosphate buffer 100 mM (pH 6.0), 100 μl ny guaiacol (TCI chemicals, Portland, OR, Etazonia) ary 100 μl ny 12 mM H2O2. Novaina kely avy amin'ny (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023) ny fomba fiasa. Natao taorian'ny fihetsika tamin'ny 3 ml ny vahaolana catechol (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, Etazonia) (0.01 M) vao avy nomanina tao anaty 0.1 M phosphate buffer (pH 6.0) ny fanadihadiana. Norefesina tamin'ny fanaraha-maso ny fahapotehan'ny H2O2 tamin'ny 240 nm (A240) ny asan'ny CAT, norefesina tamin'ny fanaraha-maso ny fitomboan'ny absorbance tamin'ny 436 nm (A436) ny asan'ny POX, ary norefesina tamin'ny fandraketana ny fiovaovan'ny absorbance tamin'ny 495 nm (A495) isaky ny 30 segondra mandritra ny 3 minitra ny asan'ny PPO tamin'ny fampiasana spectrophotometer UV-160A (Shimadzu, Japon).
Nampiasaina ny RT-PCR amin'ny fotoana tena izy mba hamantarana ny haavon'ny transcript an'ny gène telo mifandraika amin'ny antioxidant, anisan'izany ny peroxisomal catalase (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), superoxide dismutase (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), ary glutathione reductase (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1), ao amin'ny ravin'ny tsaramaso (ny ravina faharoa sy fahatelo mivelatra tanteraka avy any ambony) 72 ora aorian'ny fitsaboana farany. Raha fintinina, ny RNA dia navahana tamin'ny fampiasana ny Simply P Total RNA Extraction Kit (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, Sina) araka ny protocole-n'ny mpanamboatra. Avy eo, ny cDNA dia namboarina tamin'ny fampiasana ny TOP script™ cDNA Synthesis Kit araka ny torolalan'ny mpanamboatra. Ny filaharan'ny primer an'ireo gène telo etsy ambony ireo dia voatanisa ao amin'ny Tabilao Fanampiny S3. Ny PvActin-3 (laharana fidirana GenBank: XM_068616709.1) no nampiasaina ho gène mpikarakara trano ary ny fanehoana ny gène mifandraika dia nokajiana tamin'ny fampiasana ny fomba 2-ΔΔCT (Livak sy Schmittgen, 2001). Naseho ny fahamarinan'ny Actin eo ambany fihenjanana biotika (fifandraisana tsy mifanaraka eo amin'ny legioma mahazatra sy ny holatra anthracnose Colletotrichum lindemuthianum) ary ny fihenjanana abiotika (hain-tany, sira, mari-pana ambany) (Borges et al., 2012).
Nanao fanadihadiana in silico manerana ny genome ny proteinina oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) tao amin'ny S. sclerotiorum izahay tamin'ny voalohany, nampiasa ny fitaovana BLAST proteinina-proteinina (BLASTp 2.15.0+) (Altschul et al., 1997, 2005). Raha fintinina, nampiasa OAH avy amin'ny Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; laharan'ny fidirana GenBank XP_040799428.1; asidra amine 342) sy Penicillium lagena (PlOAH; taxide: 94218; laharan'ny fidirana GenBank XP_056833920.1; asidra amine 316) ho toy ny filaharan'ny fangatahana mba handrefesana ny proteinina homologous ao amin'ny S. sclerotiorum (taxide: 5180). Natao tamin'ny alalan'ny angon-drakitra momba ny genome S. sclerotiorum farany indrindra tao amin'ny GenBank tao amin'ny tranokalan'ny National Center for Biotechnology Information (NCBI), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ ny BLASTp.
Ankoatra izany, ny fototarazo OAH vinavinaina avy amin'ny S. sclerotiorum (SsOAH) sy ny famakafakana evolisiona ary ny hazo filôzenetika an'ny AfOAH avy amin'ny A. fijiensis CBS 313.89 sy PlOAH avy amin'ny P. lagena dia notsoahina tamin'ny fampiasana ny fomba mety indrindra ao amin'ny MEGA11 (Tamura et al., 2021) sy ny modely mifototra amin'ny matrisy JTT (Jones et al., 1992). Ny hazo filôzenetika dia nampiarahina tamin'ny famakafakana fampifanarahana marobe momba ny filaharan'ny proteinina amin'ny fototarazo OAH vinavinaina rehetra (SsOAH) avy amin'ny S. sclerotiorum sy ny filaharan'ny fangatahana mampiasa ny Constraint-Based Alignment Tool (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos sy Agarwala, 2007). Ankoatra izany, ny filaharan'ny asidra amine mifanaraka indrindra amin'ny SsOAH avy amin'ny S. sclerotiorum dia nampifanarahina tamin'ny filaharan'ny fangatahana (AfOAH sy PlOAH) (Larkin et al., 2007) tamin'ny fampiasana ny ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw), ary ireo faritra voatahiry ao amin'ny filaharana dia naseho tamin'ny fampiasana ny fitaovana ESPript (version 3.0; https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php).
Ankoatra izany, ireo sehatra solontena miasa sy toerana voatahiry ao amin'ny S. sclerotiorum SsOAH izay vinavinaina dia nozaraina ho fianakaviana samihafa tamin'ny fampiasana ny fitaovana InterPro (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) (Blum et al., 2021). Farany, ny modely rafitra telo refy (3D) an'ny S. sclerotiorum SsOAH izay vinavinaina dia natao tamin'ny fampiasana ny Protein Homology/Analogy Recognition Engine (Phyre2 server version 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (Kelley et al., 2015) ary nohamarinina tamin'ny fampiasana ny mpizara SWISS-MODEL (https://swissmodel.expasy.org/) (Biasini et al., 2014). Naseho an-tsary tamin'ny alalan'ny fampiasana ny fonosana UCSF-Chimera (dikan-teny 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/) ireo rafitra telo refy novinavinaina (endrika PDB) (Pettersen et al., 2004).
Nampiasaina ny PCR fluorescence amin'ny fotoana tena izy mba hamaritana ny haavon'ny fandikana ny oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH; laharan'ny fidirana GenBank: XM_001590428.1) ao amin'ny mycelium an'ny Sclerotinia sclerotiorum. Raha fintinina, ny S. sclerotiorum dia nampidirina tao anaty tavoara misy PDB ary napetraka tao anaty incubator hozongozonina (modely: I2400, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, Etazonia) tamin'ny 25 ± 2 °C nandritra ny 24 ora tamin'ny 150 rpm ary tao anaty haizina tsy tapaka (24 ora) mba hamporisihana ny fitomboan'ny mycelium. Taorian'izay, dia notsaboina tamin'ny L-ornithine sy ny fungisida Rizolex-T ireo sela tamin'ny fifantohana IC50 farany (eo amin'ny 40 sy 3.2 mg/L eo ho eo) ary avy eo dia nokolokoloina nandritra ny 24 ora fanampiny tamin'ny fepetra mitovy. Taorian'ny fandoroana, dia notsindronina tamin'ny 2500 rpm nandritra ny 5 minitra ireo kolontsaina ary nangonina ny ranoka avy amin'ny zavamaniry (mycelium holatra) mba hanaovana fanadihadiana momba ny fanehoana ny fototarazo. Toy izany koa, nangonina tamin'ny 0, 24, 48, 72, 96, ary 120 ora taorian'ny aretina ny mycelium holatra avy amin'ny zavamaniry voan'ny aretina izay namorona bobongolo fotsy sy mycelium landihazo teo amin'ny velaran'ny sela voan'ny aretina. Nalaina avy amin'ny mycelium holatra ny RNA ary avy eo dia novokarina araka ny voalaza etsy ambony ny cDNA. Ny filaharan'ny primer ho an'ny SsOAH dia voatanisa ao amin'ny Tabilao Fanampiny S3. Ny SsActin (laharana fidirana GenBank: XM_001589919.1) dia nampiasaina ho fototarazo mpikarakara trano, ary ny fanehoana ny fototarazo mifandraika dia nokajiana tamin'ny fampiasana ny fomba 2-ΔΔCT (Livak sy Schmittgen, 2001).
Nojerena tao anaty ron-kena dextrose ovy (PDB) sy santionan'ny zavamaniry misy ny holatra Sclerotinia sclerotiorum ny asidra oksalika araka ny fomban'i Xu sy Zhang (2000) miaraka amin'ny fanovana kely. Raha fintinina, ny S. sclerotiorum dia nampidirina tao anaty tavoara misy PDB ary avy eo dia novolena tao anaty incubator (modely I2400, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, Etazonia) tamin'ny 150 rpm tamin'ny 25 ± 2 °C nandritra ny 3–5 andro tao anaty haizina tsy tapaka (24 ora) mba hamporisihana ny fitomboan'ny mycelium. Taorian'ny incubation, ny kolontsaina holatra dia nosivanina voalohany tamin'ny taratasy sivana Whatman #1 ary avy eo dia notsindronina tamin'ny 2500 rpm nandritra ny 5 minitra mba hanesorana ny mycelium sisa tavela. Ny supernatant dia nangonina ary notehirizina tamin'ny 4°C mba hamaritana bebe kokoa ny oxalate. Ho an'ny fanomanana ny santionan'ny zavamaniry, dia nalaina intelo tamin'ny rano voadio (2 ml isaky ny mandeha) ny sombin-taolana eo amin'ny 0.1 g eo ho eo. Avy eo dia nosentrifugasiona tamin'ny 2500 rpm nandritra ny 5 minitra ireo santionany, ary nosivanina maina tamin'ny alalan'ny taratasy sivana Whatman No. 1 ny ranoka nalaina ary nangonina mba hanaovana fanadihadiana fanampiny.
Ho an'ny fanadihadiana ara-kajy ny asidra oksalika, dia nomanina tao anaty fantsona fitaratra misy sarony ny fangaroan'ny fihetsiketsehana araka izao filaharana manaraka izao: 0.2 ml santionany (na sivana kolontsaina PDB na vahaolana mahazatra asidra oksalika), 0.11 ml manga bromophenol (BPB, 1 mM; Fisher Chemical, Pittsburgh, PA, Etazonia), 0.198 ml asidra solifara 1 M (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Ejipta) ary 0.176 ml potassium dichromate 100 mM (K2Cr2O7; TCI chemicals, Portland, OR, Etazonia), ary avy eo dia nohamainina ho 4.8 ml tamin'ny rano voadio ny vahaolana, afangaro mafy ary napetraka avy hatrany tao anaty rano fandroana 60 °C. Rehefa afaka 10 minitra, dia najanona ny fihetsiketsehana tamin'ny fanampiana vahaolana sodium hydroxide 0.5 ml (NaOH; 0.75 M). Ny fidiran'ny rano (A600) amin'ny fangaroan'ny fihetsehana dia norefesina tamin'ny 600 nm tamin'ny fampiasana spektrofotometatra UV-160 (Shimadzu Corporation, Japon). Ny PDB sy ny rano voadio no nampiasaina ho fanaraha-maso ny fandrefesana ny sivana fambolena sy ny santionan'ny zavamaniry. Ny fifantohana asidra oksalika ao amin'ny sivana fambolena, izay aseho amin'ny mikrograma asidra oksalika isaky ny mililitatra amin'ny fitaovana PDB (μg.mL−1), ary ao amin'ny nalaina avy amin'ny ravina, izay aseho amin'ny mikrograma asidra oksalika isaky ny grama lanja vaovao (μg.g−1 FW), dia voafaritra tamin'ny fampiasana fiolahana fanamarinana asidra oksalika (Thermo Fisher Scientific Chemicals, Waltham, MA, Etazonia).
Nandritra ny fandalinana, ny fanandramana rehetra dia natao tamin'ny endrika kisendrasendra tanteraka (CRD) miaraka amin'ny famerenana biolojika enina isaky ny fitsaboana ary vilany dimy isaky ny famerenana biolojika (zavamaniry roa isaky ny vilany) raha tsy misy voalaza manokana. Nohadihadiana indroa ny famerenana biolojika (famerenana ara-teknika roa). Nampiasaina ny famerenana ara-teknika mba hanamarinana ny fahafahan'ny fanandramana iray ihany saingy tsy nampiasaina tamin'ny fanadihadiana statistika mba hisorohana ny famerenana diso. Nohadihadiana ara-statistika ny angon-drakitra tamin'ny alàlan'ny fanadihadiana ny fiovaovana (ANOVA) arahin'ny fitsapana fahasamihafana manan-danja marina (HSD) Tukey-Kramer (p ≤ 0.05). Ho an'ny fanandramana in vitro, ny sandan'ny IC50 sy IC99 dia nokajiana tamin'ny alàlan'ny modely probit ary nokajiana ny elanelam-pitokisana 95%.
Nisy karazana soja efatra nangonina avy amin'ny saha soja samihafa tao amin'ny Governora El Ghabiya, Ejipta. Tamin'ny alalan'ny fitaovana PDA, ireo karazana rehetra ireo dia namoaka mycelium fotsy mamy izay niova haingana ho fotsy toy ny landihazo (Sary 1A) ary avy eo beige na volontany amin'ny dingana sclerotium. Ny Sclerotia dia matetika matevina, mainty, boribory na tsy ara-dalàna ny endriny, 5.2 hatramin'ny 7.7 mm ny lavany ary 3.4 hatramin'ny 5.3 mm ny savaivony (Sary 1B). Na dia nisy karazana efatra aza namorona lamina sclerotia teo amin'ny sisin'ny fitaovana fambolena taorian'ny 10–12 andro niorenana tamin'ny 25 ± 2 °C (Sary 1A), dia samy hafa be ny isan'ny sclerotia isaky ny takelaka (P < 0.001), ary ny karazana 3 no nanana ny isan'ny sclerotia betsaka indrindra (32.33 ± 1.53 sclerotia isaky ny takelaka; Sary 1C). Toy izany koa, ny isolate #3 dia namoaka asidra oksalika bebe kokoa tao amin'ny PDB noho ny isolates hafa (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; Sary 1D). Ny isolate #3 dia naneho toetra ara-morfolojika sy mikroskopika mahazatra an'ny holatra phytopathogenic Sclerotinia sclerotiorum. Ohatra, tao amin'ny PDA, ny zanatanin'ny isolate #3 dia nitombo haingana, fotsy crème (Sary 1A), beige mivadika na mavo-volontsôkôlà salmon maivana, ary naharitra 6-7 andro tamin'ny 25 ± 2°C mba handrakotra tanteraka ny velaran'ny takelaka 9 sm ny savaivony. Mifototra amin'ireo toetra ara-morfolojika sy mikroskopika etsy ambony, ny isolate #3 dia fantatra ho Sclerotinia sclerotiorum.
Sary 1. Toetra mampiavaka ny S. sclerotiorum avy amin'ny legioma mahazatra sy ny maha-marary azy. (A) Fitomboan'ny mycelium an'ny S. sclerotiorum efatra amin'ny PDA, (B) sclerotia an'ny S. sclerotiorum efatra, (C) isan'ny sclerotia (isan-takelaka), (D) famoahana asidra oksalika amin'ny PDB (μg.mL−1), ary (E) hamafin'ny aretina (%) an'ny S. sclerotiorum efatra amin'ny legioma ara-barotra mora voan'ny aretina Giza 3 eo ambanin'ny toe-javatra misy trano fonenana. Ny sanda dia maneho ny salan'isa ± SD amin'ny famerenana biolojika dimy (n = 5). Ny litera samihafa dia manondro fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny fitsaboana (p < 0.05). (F–H) Ny soritr'aretin'ny bobongolo fotsy mahazatra dia niseho tamin'ny tahony ambonin'ny tany sy ny siliques, 10 andro taorian'ny fampidirana isolate #3 (dpi). (I) Ny fanadihadiana momba ny evolisiona ny faritra anatiny misy ny "transcribed spacer" (ITS) an'ny S. sclerotiorum isolate #3 dia natao tamin'ny fampiasana ny fomba mety indrindra ary nampitahaina tamin'ny isolate/karazana 20 azo avy amin'ny tahiry National Center for Biotechnology Information (NCBI) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Ny isa eo ambonin'ny tsipika fanangonana dia manondro ny fandrakofana ny faritra (%), ary ny isa eo ambanin'ny tsipika fanangonana dia manondro ny halavan'ny sampana.
Ankoatra izany, mba hanamafisana ny maha-marary azy, dia nampiasaina ny karazana S. sclerotiorum efatra azo mba hampidirana ny karazana tsaramaso ara-barotra mora voan'ny aretina Giza 3 ao anaty trano maitso, izay mifanaraka amin'ny postulate Koch (Sary 1E). Na dia pathogenic aza ny karazana holatra rehetra azo ary mety hanimba ny tsaramaso maitso (cv. Giza 3), ka miteraka soritr'aretina bobongolo fotsy mahazatra amin'ny faritra rehetra ambonin'ny tany (Sary 1F), indrindra amin'ny tahony (Sary 1G) sy ny voany (Sary 1H) 10 andro aorian'ny fampidirana (dpi), ny karazana 3 no karazana mahery vaika indrindra tamin'ny andrana roa tsy miankina. Ny karazana 3 no nanana ny hamafin'ny aretina ambony indrindra (%) tamin'ny zavamaniry tsaramaso (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ary 76.7 ± 3.1 tamin'ny 7, 14, ary 21 andro taorian'ny aretina; Sary 1F).
Nohamafisina bebe kokoa ny famantarana ny S. sclerotiorum isolate #3 izay tena manafika indrindra mifototra amin'ny fandaharana anatiny (ITS) (Sary 1I). Ny fanadihadiana phylogenetic teo amin'ny isolate #3 sy ny isolates/karazana reference 20 dia naneho fitoviana avo lenta (>99%) teo amin'izy ireo. Tsara homarihina fa ny S. sclerotiorum isolate #3 (533 bp) dia mitovy be amin'ny S. sclerotiorum isolate Amerikana LPM36 nalaina avy amin'ny voan-katsaka maina (laharana fidirana GenBank MK896659.1; 540 bp) sy ny S. sclerotiorum isolate Sinoa YKY211 (laharana fidirana GenBank OR206374.1; 548 bp), izay miteraka lo amin'ny tahony violet (Matthiola incana), izay samy voangona misaraka eo an-tampon'ny dendrogram (Sary 1I). Napetraka ao amin'ny tahiry NCBI ny filaharana vaovao ary nomena anarana hoe "Sclerotinia sclerotiorum - isolate YN-25" (laharana fidirana GenBank PV202792). Hita fa ny isolate 3 no isolate manafika indrindra; noho izany, ity isolate ity no nofidina hodinihina amin'ny andrana rehetra manaraka.
Nodinihina in vitro ny fiasan'ny diamine L-ornithine (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Alemaina) amin'ny fanoherana ny bakteria amin'ny fifantohana samihafa (12.5, 25, 50, 75, 100 ary 125 mg/L) amin'ny S. sclerotiorum isolate 3. Tsara homarihina fa ny L-ornithine dia naneho fiantraikany manohitra ny bakteria ary nanakana tsikelikely ny fitomboan'ny hyphae S. sclerotiorum amin'ny fomba miankina amin'ny fatra (Sary 2A, B). Tamin'ny fifantohana avo indrindra nosedraina (125 mg/L), ny L-ornithine dia naneho ny tahan'ny fanakanana ny fitomboan'ny mycelium avo indrindra (99.62 ± 0.27%; Sary 2B), izay mitovy amin'ny fungicide Rizolex-T ara-barotra (tahan'ny fanakanana 99.45 ± 0.39%; Sary 2C) amin'ny fifantohana avo indrindra nosedraina (10 mg/L), izay manondro fahombiazana mitovy.
Sary 2. Ny fiasan'ny L-ornithine amin'ny fanoherana ny Sclerotinia sclerotiorum amin'ny alalan'ny bakteria in vitro. (A) Fampitahana ny fiasan'ny L-ornithine amin'ny fanoherana ny S. sclerotiorum amin'ny fungisida Rizolex-T (10 mg/L) amidy eny an-tsena. (B, C) Tahan'ny fanakanana (%) ny fitomboan'ny mycelium S. sclerotiorum aorian'ny fitsaboana amin'ny fifantohana L-ornithine (12.5, 25, 50, 75, 100 ary 125 mg/L) na Rizolex-T (2, 4, 6, 8 ary 10 mg/L) samihafa. Ny sanda dia maneho ny salan'isa ± SD amin'ny famerenana biolojika dimy (n = 5). Ny litera samihafa dia manondro ny fahasamihafana ara-statistika eo amin'ny fitsaboana (p < 0.05). (D, E) Fanadihadiana regression modely Probit an'ny L-ornithine sy ny fungisida Rizolex-T amidy eny an-tsena. Aseho amin'ny endrika manga mazava ny tsipika fihemoran'ny modely probit, ary aseho amin'ny endrika mena tapaka ny elanelam-pitokisana (95%).
Ankoatra izany, dia natao ny fanadihadiana momba ny regression probit ary aseho ao amin'ny Tabilao 1 sy ny Sary 2D,E ny teti-drà mifandraika amin'izany. Raha fintinina, ny sandan'ny slope azo ekena (y = 2.92x − 4.67) sy ny antontan'isa manan-danja mifandraika amin'izany (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ary p < 0.0001; Sary 2D) an'ny L-ornithine dia naneho ny fiasan'ny antifungal bebe kokoa amin'ny S. sclerotiorum raha oharina amin'ny fungicide ara-barotra Rizolex-T (y = 1.96x − 0.99, Cox & Snell R2 = 0.1242, Nagelkerke R2 = 0.1708 ary p < 0.0001) (Tabilao 1).
Tabilao 1. Sanda amin'ny fifantohana antsasaky ny ambony indrindra amin'ny L-ornithine sy ny fungicide ara-barotra "Rizolex-T" manohitra ny S. sclerotiorum.
Amin'ny ankapobeny, ny L-ornithine (250 mg/L) dia nampihena be ny fivoarana sy ny hamafin'ny bobongolo fotsy tamin'ny zavamaniry tsaramaso mahazatra notsaboina raha oharina amin'ny zavamaniry voan'ny S. sclerotiorum tsy notsaboina (fanaraha-maso; Sary 3A). Raha fintinina, na dia nitombo tsikelikely aza ny hamafin'ny aretina tamin'ny zavamaniry fanaraha-maso voan'ny aretina tsy notsaboina (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ary 92.33 ± 3.06%), ny L-ornithine dia nampihena be ny hamafin'ny aretina (%) nandritra ny fanandramana (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, ary 26.36 ± 3.07) tamin'ny 7, 14, ary 21 andro taorian'ny fitsaboana (dpt), tsirairay avy (Sary 3A). Toy izany koa, rehefa notsaboina tamin'ny L-ornithine 250 mg/L ny zavamaniry tsaramaso voan'ny S. sclerotiorum, dia nihena avy amin'ny 1274.33 ± 33.13 tao amin'ny vondrona fanaraha-maso tsy voatsabo ho 281.03 ± 7.95 ny velaran-tany eo ambanin'ny fiolahana fivoaran'ny aretina (AUDPC), izay ambany kely noho ny an'ny vondrona fanaraha-maso tsara 50 mg/L Rizolex-T fungicide (183.61 ± 7.71; Sary 3B). Hita ihany koa io fironana io tamin'ny andrana faharoa.
Sary 3. Fiantraikan'ny fampiharana L-ornithine avy any ivelany amin'ny fivoaran'ny lo fotsy amin'ny tsaramaso mahazatra vokatry ny Sclerotinia sclerotiorum ao anatin'ny toe-javatra misy trano maitso. (A) Fiolahana fivoaran'ny aretina amin'ny bobongolo fotsy amin'ny tsaramaso mahazatra aorian'ny fitsaboana amin'ny L-ornithine 250 mg/L. (B) Velaran-tany eo ambanin'ny fiolahana fivoaran'ny aretina (AUDPC) amin'ny bobongolo fotsy amin'ny tsaramaso mahazatra aorian'ny fitsaboana amin'ny L-ornithine. Ny sanda dia maneho ny salan'isa ± SD amin'ny dika biolojika dimy (n = 5). Ny litera samihafa dia manondro fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny fitsaboana (p < 0.05).
Ny fampiharana ivelany ny L-ornithine 250 mg/L dia nampitombo tsikelikely ny haavon'ny zavamaniry (Sary 4A), ny isan'ny sampana isaky ny zavamaniry (Sary 4B), ary ny isan'ny ravina isaky ny zavamaniry (Sary 4C) rehefa afaka 42 andro. Raha toa ka ny fungisida Rizolex-T (50 mg/L) no nanana fiantraikany lehibe indrindra tamin'ny masontsivana ara-tsakafo rehetra nodinihina, ny fampiharana ivelany ny L-ornithine 250 mg/L no nanana fiantraikany faharoa lehibe indrindra raha oharina amin'ny fanaraha-maso tsy voatsabo (Sary 4A–C). Etsy ankilany, ny fitsaboana L-ornithine dia tsy nisy fiantraikany lehibe tamin'ny votoatin'ny pigment photosynthetic chlorophyll a (Sary 4D) sy chlorophyll b (Sary 4E), saingy nampitombo kely ny votoatin'ny carotenoid manontolo (0.56 ± 0.03 mg/g fr wt) raha oharina amin'ny fanaraha-maso ratsy (0.44 ± 0.02 mg/g fr wt) sy fanaraha-maso tsara (0.46 ± 0.02 mg/g fr wt; Sary 4F). Amin'ny ankapobeny, ireo valiny ireo dia manondro fa ny L-ornithine dia tsy misy poizina amin'ny legioma efa notsaboina ary mety hamporisika ny fitomboany mihitsy aza.
Sary 4. Fiantraikan'ny fampiharana L-ornithine avy any ivelany amin'ny toetran'ny fitomboana sy ny loko fotosintetika amin'ny ravin'ny tsaramaso voan'ny Sclerotinia sclerotiorum ao anaty trano maitso. (A) Haavon'ny zavamaniry (sm), (B) Isan'ny sampana isaky ny zavamaniry, (C) Isan'ny ravina isaky ny zavamaniry, (D) Votoatin'ny klorofila a (mg g-1 fr wt), (E) Votoatin'ny klorofila b (mg g-1 fr wt), (F) Votoatin'ny karotenoida manontolo (mg g-1 fr wt). Ny sanda dia ny salan'isa ± SD amin'ny dika mitovy biolojika dimy (n = 5). Ny litera samihafa dia manondro fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny fitsaboana (p < 0.05).
Ny toerana misy ny karazana oksizenina mihetsika (ROS; aseho amin'ny peroxyde hydrogène [H2O2]) sy ny radika afaka (aseho amin'ny anion superoxide [O2•−]) amin'ny alalan'ny histochemical in situ dia naneho fa ny fampiharana ivelany ny L-ornithine (250 mg/L) dia nampihena be dia be ny fiangonan'ny H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; Sary 5A) sy O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW; Sary 5B) raha oharina amin'ny fiangonan'ny zavamaniry voan'ny aretina tsy voatsabo (173.31 ± 12.06 sy 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW) sy ny zavamaniry notsaboina tamin'ny 50 mg/L amin'ny fungicide ara-barotra Rizolex-T (170.12 ± 9.50 sy 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt) amin'ny 72 ora. Avo dia avo ny tahan'ny H2O2 sy O2•− voangona eo ambanin'ny hpt (Sary 5A, B). Toy izany koa, ny fanadihadiana malondialdehyde (MDA) mifototra amin'ny TCA dia naneho fa ny zavamaniry tsaramaso voan'ny S. sclerotiorum dia nanangona tahan'ny MDA ambony kokoa (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) tao amin'ny raviny (Sary 5C). Na izany aza, ny fampiharana L-ornithine avy any ivelany dia nampihena be ny peroxidation lipida araka ny asehon'ny fihenan'ny votoatin'ny MDA tamin'ny zavamaniry notsaboina (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
Sary 5. Fiantraikan'ny fampiharana L-ornithine avy any ivelany amin'ny mari-pamantarana lehibe amin'ny fihenjanana oksidativa sy ny mekanisma fiarovana antioxidant tsy anzima amin'ny ravin'ny tsaramaso voan'ny S. sclerotiorum 72 ora aorian'ny aretina ao anatin'ny toe-javatra misy trano maitso. (A) Peroxyde hydrogène (H2O2; nmol g−1 FW) amin'ny 72 hpt, (B) Anion superoxide (O2•−; nmol g−1 FW) amin'ny 72 hpt, (C) malondialdehyde (MDA; nmol g−1 FW) amin'ny 72 hpt, (D) fenol mety levona manontolo (mg GAE g−1 FW) amin'ny 72 hpt, (E) flavonoida mety levona manontolo (mg RE g−1 FW) amin'ny 72 hpt, (F) asidra amine afaka manontolo (mg g−1 FW) amin'ny 72 hpt, ary (G) votoatin'ny proline (mg g−1 FW) amin'ny 72 hpt. Ny sanda dia maneho ny salan'isa ± fivilian-dàlana mahazatra (salan'isa ± SD) amin'ny famerenana biolojika 5 (n = 5). Ny litera samihafa dia manondro fahasamihafana manan-danja ara-statistika eo amin'ny fitsaboana (p < 0.05).