Misaotra anao nitsidika ny Nature.com. Voafetra ny fanohanana ny CSS amin'ny dikan-tranonkala ampiasainao. Ho an'ny traikefa tsara indrindra, manoro hevitra anao izahay hampiasa navigateur nohavaozina (na hamono ny fomba mifanaraka amin'ny Internet Explorer). Mandritra izany fotoana izany, mba hahazoana antoka fa mitohy ny fanohanana, dia hampiseho ny tranonkala tsy misy styles sy JavaScript izahay.
Ireo nanoparticles insuline (NPs) manana votoaty be dia be dia nahita fampiharana samihafa amin'ny endrika fatra samihafa. Ity asa ity dia mikendry ny hanombana ny fiantraikan'ny dingana fanamainana mangatsiaka sy fanamainana amin'ny firafitry ny nanoparticles chitosan feno insuline, miaraka na tsy misy mannitol ho toy ny cryoprotectant. Nanombana ny kalitaon'ireo nanoparticles ireo ihany koa izahay tamin'ny alàlan'ny fandrendrehana azy ireo indray. Talohan'ny fanamainana, ny haben'ny poti-javatra amin'ny chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin cross-linked nanoparticles dia nohatsaraina ho 318 nm, ny PDI dia 0.18, ny fahombiazan'ny encapsulation dia 99.4%, ary ny enta-mavesatra dia 25.01%. Taorian'ny fanamboarana indray, ny nanoparticles rehetra, afa-tsy ireo novokarina tamin'ny fomba fanamainana mangatsiaka tsy misy fampiasana mannitol, dia nitazona ny firafitry ny poti-javatra boribory. Raha ampitahaina amin'ny nanoparticles misy mannitol izay nohamainina tamin'ny alalan'ny famafazana, ny nanoparticles maina tsy misy mannitol dia naneho ihany koa ny haben'ny poti-javatra kely indrindra (376 nm) sy ny votoaty enta-mavesatra ambony indrindra. (25.02%) miaraka amin'ny tahan'ny famonosana mitovy (98.7%) sy PDI (0.20) amin'ny alàlan'ny teknika fanamainana na fanamainana mangatsiaka. Ny nanoparticles maina amin'ny alàlan'ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol dia nahatonga ny famoahana insuline haingana indrindra sy ny fahombiazana ambony indrindra amin'ny fidiran'ny sela. Ity asa ity dia mampiseho fa ny fanamainana amin'ny famafazana dia afaka manala ny nanoparticles insuline tsy mila cryoprotectants raha oharina amin'ny fomba fanamainana mangatsiaka mahazatra, ka mamorona fahafaha-mamokatra bebe kokoa, fepetra takiana amin'ny additive ambany kokoa ary vidin'ny fandidiana tombony lehibe.
Hatramin'ny nahitana azy tamin'ny 19221,2,3, ny insuline sy ny fanafody ao aminy dia namonjy ny ain'ireo marary voan'ny diabeta karazany 1 (T1DM) sy diabeta karazany 2 (T1DM). Na izany aza, noho ny toetrany amin'ny maha-proteinina lanja molekiolany avo lenta azy, dia mora miangona ny insuline, rava amin'ny alalan'ny anzima proteolytika, ary esorina amin'ny alalan'ny vokatra voalohany. Ireo olona voamarina fa voan'ny diabeta karazany 1 dia mila tsindrona insuline mandritra ny androm-piainany. Maro amin'ireo marary voamarina fa voan'ny diabeta karazany 2 no mila tsindrona insuline maharitra ihany koa. Ny tsindrona insuline isan'andro dia loharanon'ny fanaintainana sy ny tsy fahazoana aina isan'andro ho an'ireo olona ireo, miaraka amin'ny fiantraikany ratsy amin'ny fahasalamana ara-tsaina. Vokatr'izany, ny endrika hafa amin'ny fampidirana insuline izay miteraka tsy fahazoana aina firy, toy ny fampidirana insuline am-bava, dia ianarana betsaka5 satria manana ny fahafahana mamerina amin'ny laoniny ny kalitaon'ny fiainan'ny olona 5 lavitrisa eo ho eo voan'ny diabeta manerantany.
Nandroso be ny teknolojia nanoparticle amin'ny fiezahana handray insuline am-bava4,6,7. Iray izay mamatotra sy miaro ny insuline amin'ny fahasimbana mba halefa any amin'ny toerana voafaritra tsara amin'ny vatana. Na izany aza, ny fampiasana ny formulations nanoparticle dia misy fetrany maromaro, indrindra noho ny olana momba ny fahamarinan'ny fampiatoana ny poti-javatra. Mety hitranga ny fanangonana sasany mandritra ny fitahirizana, izay mampihena ny bioavailability ny nanoparticles feno insuline8. Ho fanampin'izany, ny fahamarinan'ny simikan'ny matrice polymer an'ny nanoparticles sy insuline dia tsy maintsy dinihina ihany koa mba hahazoana antoka ny fahamarinan'ny nanoparticles insuline (NPs). Amin'izao fotoana izao, ny teknolojia fanamainana mangatsiaka no fenitra volamena amin'ny famoronana NPs marin-toerana sady misoroka ny fiovana tsy ilaina mandritra ny fitahirizana9.
Na izany aza, ny fanamainana amin'ny alalan'ny hatsiaka dia mitaky ny fanampiana "cryoprotectants" mba hisorohana ny firafitry ny NP amin'ny endrika boribory tsy ho voakasiky ny tsindry mekanika ateraky ny kristaly ranomandry. Izany dia mampihena be ny enta-mavesatry ny nanoparticles insuline aorian'ny lyophilization, satria ny cryoprotectant no mitana ny ankamaroan'ny tahan'ny lanja. Noho izany, ny NPs insuline vokarina dia matetika hita fa tsy mety amin'ny fanamboarana vovoka maina, toy ny takelaka am-bava sy sarimihetsika am-bava, noho ny filàna nanoparticles maina be dia be mba hahatratrarana ny vanim-potoana fitsaboana insuline.
Ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana dia dingana indostrialy malaza sy tsy lafo vidy amin'ny famokarana vovoka maina avy amin'ny dingana ranoka ao amin'ny indostrian'ny fanafody10,11. Ny fanaraha-maso ny fizotran'ny fiforonan'ny poti-javatra dia ahafahana mampiditra tsara ireo singa bioactive maromaro 12, 13. Ankoatra izany, dia lasa teknika mahomby amin'ny fanomanana proteinina voafono ho an'ny fampiasana am-bava izany. Mandritra ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana, dia mihena haingana ny rano, izay manampy amin'ny fitazonana ny mari-pana ao amin'ny fotony poti-javatra ho ambany11,14, ka ahafahana mampiasa azy io mba hampidirana ireo singa mora tohina amin'ny hafanana. Alohan'ny hanamainana amin'ny alalan'ny famafazana, dia tokony ho homogeneous tsara amin'ny vahaolana misy ireo akora voafono ny fitaovana fanosotra11,14. Tsy toy ny fanamainana mangatsiaka, ny homogenization alohan'ny fampidirana amin'ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana dia manatsara ny fahombiazan'ny fampidirana mandritra ny tsy fahampian-drano. Satria tsy mila cryoprotectants ny fizotran'ny fampidirana amin'ny alalan'ny famafazana, dia azo ampiasaina ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana mba hamokarana NP maina misy votoaty be dia be.
Ity fandalinana ity dia mitatitra ny famokarana NP feno insuline amin'ny alàlan'ny fampifandraisana chitosan sy sodium tripolyphosphate amin'ny alàlan'ny fomba ion gel. Ny ion gelation dia fomba fanomanana izay ahafahana mamokatra nanoparticles amin'ny alàlan'ny fifandraisana elektrostatika eo amin'ny karazana ionika roa na maromaro amin'ny fepetra sasany. Samy nampiasaina ny teknika fanamainana mangatsiaka sy ny teknika fanamainana amin'ny famafazana mba hanamainana ny nanoparticles mifamatotra amin'ny chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin. Rehefa avy nesorina ny rano dia nohadihadiana tamin'ny alàlan'ny SEM ny morphology-ny. Nodinihina ny fahafahan'izy ireo mitambatra indray tamin'ny alàlan'ny fandrefesana ny fizarana ny habeny, ny fiampangana amboniny, ny PDI, ny fahombiazan'ny encapsulation, ary ny votoatin'ny enta-mavesatra. Ny kalitaon'ny nanoparticles levona novokarin'ny fomba fanesorana rano samihafa dia nodinihina ihany koa tamin'ny alàlan'ny fampitahana ny fiarovana ny insuline, ny fitondran-tena famoahana, ary ny fahombiazan'ny sela.
Ny pH-n'ny vahaolana mifangaro sy ny tahan'ny chitosan sy insuline dia anton-javatra roa lehibe izay misy fiantraikany amin'ny haben'ny poti sy ny fahombiazan'ny encapsulation (EE) an'ny NP farany, satria misy fiantraikany mivantana amin'ny fizotran'ny gelation ionotropic. Ny pH-n'ny vahaolana mifangaro dia naseho fa mifandray akaiky amin'ny haben'ny poti sy ny fahombiazan'ny encapsulation (Sary 1a). Araka ny aseho amin'ny Sary 1a, rehefa nitombo avy amin'ny 4.0 ka hatramin'ny 6.0 ny pH, dia nihena ny haben'ny poti antonony (nm) ary nitombo be ny EE, raha toa kosa rehefa nitombo ho 6.5 ny pH, dia nanomboka nitombo ny haben'ny poti antonony ary tsy niova ny EE. Rehefa mitombo ny tahan'ny chitosan amin'ny insuline, dia mitombo ihany koa ny haben'ny poti antonony. Ankoatra izany, tsy nisy fiovana teo amin'ny EE hita rehefa nomanina tamin'ny tahan'ny chitosan/insulinina mihoatra ny 2.5:1 (w/w) ny nanoparticles (Sary 1b). Noho izany, ny fepetra fanomanana tsara indrindra amin'ity fandalinana ity (pH 6.0, tahan'ny chitosan/insulinina 2.5:1) dia nampiasaina mba Manomana nanoparticles feno insuline ho an'ny fandalinana fanampiny. Teo ambanin'ity fepetra fanomanana ity, ny haben'ny poti-javatra antonony amin'ny nanoparticles insuline dia nohatsaraina ho 318 nm (Sary 1c), ny PDI dia 0.18, ny fahombiazan'ny fampidirana dia 99.4%, ny zeta potential dia 9.8 mv, ary ny insuline loading dia 25.01% (m/m). Mifototra amin'ny valin'ny mikroskopia elektrôna fandefasana (TEM), ny nanoparticles nohatsaraina dia boribory sy misaraka miaraka amin'ny habe mitovy (Sary 1d).
Fanatsarana ny masontsivana amin'ny nanoparticles insuline: (a) ny fiantraikan'ny pH amin'ny savaivony antonony sy ny fahombiazan'ny encapsulation (EE) amin'ny nanoparticles insuline (voaomana amin'ny tahan'ny faobe 5:1 amin'ny chitosan sy insuline); (b) chitosan sy ny fiantraikan'ny tahan'ny faobe amin'ny insuline amin'ny savaivony antonony sy ny fahombiazan'ny encapsulation (EE) amin'ny insuline NPs (voaomana amin'ny pH 6); (c) fizarana haben'ny poti amin'ny nanoparticles insuline nohatsaraina; (d) mikrografy TEM amin'ny insuline NPs nohatsaraina.
Fantatra tsara fa ny chitosan dia polyelectrolyte malemy miaraka amin'ny pKa 6.5. Mitondra fiampangana tsara izy io ao anaty tontolo asidra satria ny vondrona amine lehibe ao aminy dia protonated amin'ny ion hidrôzenina 15. Noho izany, matetika izy io no ampiasaina ho toy ny mpitatitra mba handraisana ireo macromolecules misy fiampangana ratsy. Ato amin'ity fandalinana ity, ny chitosan dia nampiasaina handraisana ny insuline miaraka amin'ny teboka isoelectric 5.3. Koa satria ny chitosan dia ampiasaina ho fitaovana fanosotra, miaraka amin'ny fitomboan'ny ampahany aminy, dia mitombo mifanaraka amin'izany ny hatevin'ny sosona ivelany amin'ny nanoparticles, ka miteraka haben'ny poti lehibe kokoa. Ankoatra izany, ny haavon'ny chitosan ambony kokoa dia afaka mirakitra insuline bebe kokoa. Amin'ny tranga misy anay, ny EE dia avo indrindra rehefa nahatratra 2.5:1 ny tahan'ny chitosan sy insuline, ary tsy nisy fiovana lehibe teo amin'ny EE rehefa nitombo hatrany ny tahan'ny.
Ankoatra ny tahan'ny chitosan sy insuline, ny pH koa dia nitana anjara toerana lehibe tamin'ny fanomanana ny NPs. Gan et al. 17 dia nandalina ny fiantraikan'ny pH amin'ny haben'ny poti-javatra nanoparticles chitosan. Nahita fihenan'ny haben'ny poti-javatra mitohy izy ireo mandra-pahatongan'ny pH 6.0, ary fitomboana lehibe teo amin'ny haben'ny poti-javatra no hita tamin'ny pH > 6.0, izay mifanaraka amin'ny fandinihanay. Ity trangan-javatra ity dia noho ny zava-misy fa rehefa mitombo ny pH, ny molekiola insuline dia mahazo fiampangana ratsy amin'ny ambonin'ny tany, ka izany no mahatonga ny fifandraisana elektrostatika amin'ny chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP) complex, ka miteraka haben'ny poti-javatra kely sy EE avo. Na izany aza, rehefa namboarina ho 6.5 ny pH, dia nesorina ny protonan'ny vondrona amine ao amin'ny chitosan, ka miteraka fivangongoan'ny chitosan. Noho izany, ny pH avo dia miteraka fihenan'ny fihanaky ny ion amine amin'ny TPP sy insuline, ka miteraka fifandraisana ambany kokoa, haben'ny poti-javatra farany lehibe kokoa ary EE ambany kokoa.
Ny famakafakana ny toetra ara-morfolojikan'ny NP maina mangatsiaka sy maina amin'ny alalan'ny famafazana dia afaka mitarika amin'ny fisafidianana teknika fanamainana sy fananganana vovoka tsara kokoa. Ny fomba tiana indrindra dia tokony hanome fahamarinan-toerana amin'ny fanafody, endrika poti mitovy, famenoana fanafody avo lenta ary fahafaha-malefaka tsara ao anaty vahaolana tany am-boalohany. Ato amin'ity fandalinana ity, mba hampitahana tsara kokoa ireo teknika roa ireo, ny NP insuline misy na tsy misy mannitol 1% no nampiasaina nandritra ny fanamainana. Ny Mannitol dia ampiasaina ho toy ny akora mampitombo na cryoprotectant amin'ny endrika vovoka maina isan-karazany ho an'ny fanamainana mangatsiaka sy ny fanamainana amin'ny famafazana. Ho an'ny nanoparticles insuline lyophilized tsy misy mannitol, araka ny aseho amin'ny Sary 2a, dia hita teo ambanin'ny mikroskopia elektronika scanning (SEM) ny firafitry ny vovoka misy porous be miaraka amin'ny velarana lehibe, tsy ara-dalàna ary henjana. Vitsy ny poti miavaka hita tao amin'ny vovoka taorian'ny fanamainana (Sary 2e). Ireo valiny ireo dia nanondro fa ny ankamaroan'ny NP dia potika nandritra ny fanamainana mangatsiaka tsy misy cryoprotectant. Ho an'ny nanoparticles insuline maina mangatsiaka sy maina misy mannitol 1%, dia hita ny nanoparticles boribory misy velarana malama (Sary 1). 2b,d,f,h). Nijanona ho boribory ireo poti-insulinina maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol fa niketrona teo amin'ny velarana (Sary 2c). Hodinihina bebe kokoa ao amin'ny fitiliana ny fihetsika famoahana sy ny fidiran'ny sela etsy ambany ireo velarana boribory sy miketrona. Miorina amin'ny endrika hita maso amin'ireo NP maina, ny NP maina amin'ny famafazana tsy misy mannitol sy ny NP maina amin'ny hatsiaka sy maina amin'ny famafazana miaraka amin'ny mannitol dia samy nahazo vovoka NP tsara (Sary 2f,g,h). Arakaraka ny haben'ny velarana eo anelanelan'ny velaran'ny poti-javatra no avo kokoa ny fahafahan'ny poti-javatra levona ary noho izany dia avo kokoa ny tahan'ny famoahana.
Endriky ny insuline NP maina samihafa: (a) Sary SEM an'ny insuline NP voahosotra tsy misy mannitol; (b) Sary SEM an'ny insuline NP voahosotra misy mannitol; (c) insuline NP maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol Sary SEM an'ny ; (d) Sary SEM an'ny insuline NP maina amin'ny alalan'ny famafazana amin'ny mannitol; (e) Sary vovoka insuline NP voahosotra tsy misy mannitol; (f) Sary insuline NP voahosotra misy mannitol; (g) Sary vovoka insuline NP maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol; (h) Sary vovoka insuline NP maina amin'ny alalan'ny famafazana misy mannitol.
Mandritra ny fanamainana mangatsiaka, ny mannitol dia miasa toy ny cryoprotectant, mitazona ny NPs amin'ny endrika tsy misy endrika ary misoroka ny fahasimban'ny kristaly ranomandry19. Mifanohitra amin'izany kosa, tsy misy dingana mangatsiaka mandritra ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana. Noho izany dia tsy ilaina ny mannitol amin'ity fomba ity. Raha ny marina, ny NPs maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol dia nahazo NP tsara kokoa araka ny voalaza teo aloha. Na izany aza, ny mannitol dia mbola afaka miasa toy ny famenoana amin'ny fizotran'ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana mba hanomezana ny NPs rafitra boribory kokoa20 (Sary 2d), izay manampy amin'ny fahazoana fihetsika famoahana mitovy amin'ny NPs voafono toy izany. Ankoatra izany, mazava fa misy poti-javatra lehibe sasany azo hita ao amin'ny NPs insuline maina amin'ny alalan'ny famafazana sy ny NPs misy mannitol (Sary 2b,d), izay mety ho vokatry ny fiangonan'ny mannitol ao amin'ny fotony poti-javatra miaraka amin'ny insuline voafono. To. Sosona kitosan. Tsara homarihina fa ato amin'ity fandalinana ity, mba hahazoana antoka fa mijanona ho tsy simba ny rafitra boribory aorian'ny tsy fahampian-drano, dia tazonina amin'ny 5:1 ny tahan'ny mannitol sy kitosan, mba hahafahan'ny fameno betsaka mampitombo ny haben'ny poti-javatra amin'ny NP maina.
Ny spectroscopy Fourier transform infrared attenuated total reflection (FTIR-ATR) dia nanavaka ny fifangaroan'ny insuline maimaim-poana, chitosan, chitosan, TPP ary insuline. Ny NP maina rehetra dia nohamarinina tamin'ny fampiasana spectroscopy FTIR-ATR. Tsara homarihina fa ny hamafin'ny tarika 1641, 1543 ary 1412 cm-1 dia hita tao amin'ny NP voafono izay maina amin'ny alalan'ny mannitol ary tao amin'ny NP maina amin'ny alalan'ny famafazana miaraka amin'ny sy tsy misy mannitol (Sary 3). Araka ny voalaza teo aloha, ireo fitomboan'ny tanjaka ireo dia mifandray amin'ny fifandraisana eo amin'ny chitosan, TPP ary insuline. Ny fanadihadiana momba ny fifandraisana misy eo amin'ny chitosan sy ny insuline dia naneho fa ao amin'ny spectra FTIR amin'ny nanoparticles chitosan misy insuline, ny tarika chitosan dia mifanindry amin'ny an'ny insuline, mampitombo ny hamafin'ny carbonyl (1641 cm-1) sy ny fehikibo amine (1543 cm-1). Ny vondrona tripolyphosphate an'ny TPP dia mifandray amin'ny vondrona ammonium ao amin'ny chitosan, mamorona tarika. amin'ny 1412 sm-1.
Spektra FTIR-ATR an'ny insuline maimaim-poana, chitosan, fangaro ara-batana amin'ny chitosan/TPP/insulinina ary NPs nohamainina tamin'ny fomba samihafa.
Ankoatra izany, ireo valiny ireo dia mifanaraka amin'ireo aseho amin'ny SEM, izay naneho fa ireo NP voafono dia nijanona ho tsy simba na rehefa nofafazana na nohamainina tamin'ny mannitol, fa raha tsy nisy mannitol, ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana ihany no namokatra poti-javatra voafono. Mifanohitra amin'izany kosa, ny valin'ny spektra FTIR-ATR an'ny NP maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol dia mitovy be amin'ny fifangaroan'ny chitosan, TPP, ary insuline. Ity valiny ity dia manondro fa ny fifandraisana misy eo amin'ny chitosan, TPP ary insuline dia tsy misy intsony amin'ny NP maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol. Potika ny rafitry ny NP nandritra ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy cryoprotectant, izay hita amin'ny valin'ny SEM (Sary 2a). Mifototra amin'ny morphology sy ny valin'ny FTIR an'ny NP insuline maina, ny NP lyophilized, maina amin'ny alalan'ny famafazana, ary tsy misy mannitol ihany no nampiasaina tamin'ny andrana fanamboarana sy NP tsy misy mannitol noho ny fahapotehan'ny NP tsy misy mannitol nandritra ny tsy fahampian-drano. Hazavao.
Ny tsy fahampian-drano dia ampiasaina amin'ny fitahirizana maharitra sy ny fanodinana indray ho lasa fangaro hafa. Ny fahafahan'ny NP maina miverina amin'ny laoniny aorian'ny fitahirizana dia tena ilaina amin'ny fampiasana azy ireo amin'ny fangaro samihafa toy ny takelaka sy sarimihetsika. Voamarikay fa ny haben'ny poti-javatra antonony amin'ny NP insuline maina amin'ny tsy fisian'ny mannitol dia nitombo kely fotsiny taorian'ny fanamboarana azy. Etsy ankilany, nitombo be ny haben'ny poti-javatra amin'ny nanoparticles insuline maina amin'ny famafazana sy mangatsiaka miaraka amin'ny mannitol (Tabilao 1). Tsy niova be ny PDI sy EE (p > 0.05) taorian'ny fampifangaroana ny NP rehetra tamin'ity fandalinana ity (Tabilao 1). Ity valiny ity dia manondro fa ny ankamaroan'ny poti-javatra dia nijanona ho tsy simba taorian'ny nanesorana azy indray. Na izany aza, ny fanampiana mannitol dia nahatonga ny fihenan'ny insuline be dia be tamin'ny nanoparticles mannitol lyophilized sy maina amin'ny famafazana (Tabilao 1). Mifanohitra amin'izany, ny votoatin'ny insuline amin'ny NP maina amin'ny famafazana tsy misy mannitol dia nijanona ho toy ny teo aloha (Tabilao 1).
Fantatra tsara fa tena ilaina ny famenoana ireo nanoparticles rehefa ampiasaina amin'ny fanaterana fanafody. Ho an'ny NPs misy famenoana ambany, dia ilaina ny fitaovana be dia be mba hahatratrarana ny tokonam-pitsaboana. Na izany aza, ny viscosity avo lenta amin'ny fifantohana NP avo lenta toy izany dia miteraka fahasahiranana sy fahasarotana amin'ny fampidirana am-bava sy ny endrika tsindrona, tsirairay avy. 22 Ankoatra izany, ny NPs insuline dia azo ampiasaina ihany koa hanaovana takelaka sy biofilms viscous23, 24, izay mitaky ny fampiasana NPs betsaka amin'ny ambaratonga famenoana ambany, ka miteraka takelaka lehibe sy biofilms matevina izay tsy mety amin'ny fampiharana am-bava. Noho izany, ny NP maina misy famenoana insuline avo dia tena ilaina. Ny valin'ny fikarohanay dia manondro fa ny famenoana insuline avo lenta amin'ny NPs maina tsy misy mannitol dia afaka manolotra tombony maro manintona ho an'ireo fomba fanaterana hafa ireo.
Notehirizina tao anaty vata fampangatsiahana nandritra ny telo volana ny NP rehetra efa maina. Ny valin'ny SEM dia naneho fa tsy niova firy ny endriky ny NP rehetra efa maina nandritra ny fitahirizana telo volana (Sary 4). Rehefa avy nafangaro tao anaty rano, dia naneho fihenana kely tao amin'ny EE ny NP rehetra ary namoaka insuline kely (~5%) nandritra ny fitahirizana telo volana (Tabilao 2). Na izany aza, nitombo ny haben'ny poti-javatra antonony tamin'ny nanoparticles rehetra. Nitombo ho 525 nm ny haben'ny poti-javatra tamin'ny spray-dryed tsy nisy mannitol, raha nitombo ho 872 sy 921 nm kosa ny an'ny NP spray-dryed sy freeze-dryed misy mannitol (Tabilao 2).
Endriky ny insuline NP maina samihafa voatahiry mandritra ny telo volana: (a) Sary SEM an'ny insuline NP voadio miaraka amin'ny mannitol; (b) Sary SEM an'ny nanopartikela insuline maina amin'ny famafazana tsy misy mannitol; (c) tsy misy mannitol Sary SEM an'ny insuline NP maina amin'ny famafazana.
Ankoatra izany, hita tao amin'ireo nanoparticles insuline namboarina izay nohamainina tamin'ny mannitol ary nohamainina tamin'ny hatsiaka (Sary S2). Mety ho vokatry ny poti-javatra lehibe tsy mihantona tsara ao anaty rano izany. Ny valiny rehetra etsy ambony dia mampiseho fa ny teknika fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana dia afaka miaro ny nanoparticles insuline amin'ny tsy fahampian-drano ary azo atao ny mahazo nanoparticles insuline be dia be tsy misy fameno na cryoprotectants.
Notsapaina tamin'ny pH = 2.5 ny fitazonana insuline niaraka tamin'ny pepsin, trypsin, ary α-chymotrypsin mba hampisehoana ny fahafahan'ny NP miaro amin'ny fandevonan-kanina anzima aorian'ny tsy fahampian-drano. Noharina tamin'ny an'ny NP vao nomanina ny fitazonana insuline an'ny NP tsy maina, ary nampiasaina ho fanaraha-maso ratsy ny insuline afaka. Ato amin'ity fandalinana ity, ny insuline afaka dia naneho fandroahana insuline haingana tao anatin'ny 4 ora tamin'ny fitsaboana anzima telo (Sary 5a–c). Mifanohitra amin'izany, ny fitsapana fandroahana insuline an'ny NP maina amin'ny mannitol sy ny NP maina amin'ny famafazana miaraka na tsy misy mannitol dia naneho fiarovana ambony kokoa an'ireo NP ireo amin'ny fandevonan-kanina anzima, izay mitovy amin'ny an'ny NP insuline vao nomanina (sary 1).5a-c). Noho ny fanampian'ny nanoparticles ao amin'ny pepsin, trypsin, ary α-chymotrypsin, mihoatra ny 50%, 60%, ary 75% amin'ny insuline no azo arovana ao anatin'ny 4 ora tsirairay avy (Sary 5a–c). Ity fahafahana miaro insuline ity dia mety mampitombo ny mety hisian'ny fidiran'ny insuline betsaka kokoa ao amin'ny lalan-dra25. Ireo valiny ireo dia manondro fa ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana miaraka na tsy misy mannitol sy ny fanamainana amin'ny alalan'ny hatsiaka miaraka amin'ny mannitol dia afaka miaro ny fahafahan'ny NP miaro ny insuline aorian'ny tsy fahampian-drano.
Fiarovana sy famotsorana ny insuline NP maina: (a) fiarovana ny insuline ao anaty vahaolana pepsin; (b) fiarovana ny insuline ao anaty vahaolana trypsin; (c) fiarovana ny insuline amin'ny alalan'ny vahaolana α-chymotrypsin; (d) Ny famotsorana ny NP maina ao anaty vahaolana pH = 2.5; (e) ny famotsorana ny NP maina ao anaty vahaolana pH = 6.6; (f) ny famotsorana ny NP maina ao anaty vahaolana pH = 7.0.
Notehirizina tao anaty buffer isan-karazany (pH = 2.5, 6.6, 7.0) tamin'ny 37 °C ireo insuline NP maina vao avy nomanina sy namboarina, mba hanahafana ny tontolo pH ao amin'ny vavony, ny duodenum, ary ny tsinay kely ambony, mba handinihana ny fiantraikan'ny insuline amin'ny fanoherana ny insuline. Fitondran-tena famoahana amin'ny tontolo iainana samihafa. Sombin-javatra amin'ny lalan-kanina. Amin'ny pH = 2.5, ny NP feno insuline sy ny NP insuline maina levona dia naneho famoahana tampoka voalohany tao anatin'ny adiny iray voalohany, arahin'ny famoahana miadana mandritra ny 5 ora manaraka (Sary 5d). Io famoahana haingana io amin'ny voalohany dia azo inoana fa vokatry ny fanesorana haingana ny molekiola proteinina izay tsy tafapetraka tanteraka ao amin'ny rafitra anatiny amin'ny poti. Amin'ny pH = 6.5, ny NP feno insuline sy ny NP insuline maina naverina namboarina dia naneho famoahana malefaka sy miadana nandritra ny 6 ora, satria ny pH an'ny vahaolana fitsapana dia mitovy amin'ny an'ny vahaolana nomanina tamin'ny NP (Sary 5e). Amin'ny pH = 7, ny NP dia tsy marin-toerana ary saika levona tanteraka tao anatin'ny adiny roa voalohany (Sary 5f). Izany dia satria ny deprotonation ny chitosan dia mitranga amin'ny pH ambony kokoa, izay miteraka tambajotra polymer tsy dia matevina loatra sy famoahana insuline feno.
Ankoatra izany, ireo NP insuline maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol dia naneho endrika famoahana haingana kokoa noho ireo NP maina hafa (Sary 5d–f). Araka ny voalaza teo aloha, ireo NP insuline namboarina indray maina tsy misy mannitol dia naneho ny haben'ny poti kely indrindra. Ny poti kely dia manome velaran-tany lehibe kokoa, ka ny ankamaroan'ny fanafody mifandraika amin'izany dia ho eo amin'ny na akaikin'ny velaran'ny poti, ka hiteraka famoahana fanafody haingana26.
Nodinihina tamin'ny alalan'ny MTT assay ny mety ho poizina ateraky ny NP. Araka ny aseho amin'ny Sary S4, ny NP maina rehetra dia hita fa tsy misy fiantraikany lehibe amin'ny fahaveloman'ny sela amin'ny fifantohana 50–500 μg/ml, izay manondro fa ny NP maina rehetra dia azo ampiasaina soa aman-tsara mba hahatratrarana ny fe-potoana fitsaboana.
Ny aty no taova lehibe indrindra ampiasain'ny insuline hanatanterahana ny asany ara-batana. Ny sela HepG2 dia sela hepatoma olombelona izay matetika ampiasaina ho modely fidiran'ny hepatocyte in vitro. Eto, ny sela HepG2 dia nampiasaina hanombanana ny fidiran'ny sela NP maina amin'ny alàlan'ny fomba fanamainana mangatsiaka sy fanamainana amin'ny famafazana. Ny fidiran'ny sela amin'ny alàlan'ny scan laser confocal amin'ny alàlan'ny cytometry mikoriana sy ny fahitana aorian'ny ora maromaro amin'ny incubation miaraka amin'ny insuline FITC maimaim-poana amin'ny fifantohana 25 μg/mL, NP FITC vao voaomana misy insuline ary NP FITC maina misy insuline amin'ny fifantohana mitovy amin'ny insuline. Natao ny fandinihana mikroskopia quantitative (CLSM). Ny NP Lyophilized tsy misy mannitol dia potika nandritra ny tsy fahampian-drano ary tsy nojerena tamin'ity fitsapana ity. Ny hamafin'ny fluorescence intracellular an'ny NP vao voaomana misy insuline, NP lyophilized misy mannitol, ary NP spray-dryed misy sy tsy misy mannitol (Sary 6a) dia 4.3, 2.6, 2.4, ary 4.1 heny ambony noho ny ireo afaka. vondrona FITC-insulin, tsirairay avy (Sary 6b). Ireo valiny ireo dia manondro fa ny insuline voafono dia mahery kokoa amin'ny fidiran'ny sela noho ny insuline afaka, indrindra noho ny haben'ny nanoparticles feno insuline novokarina tao amin'ny fanadihadiana.
Fidiran'ny sela HepG2 aorian'ny incubation 4 ora miaraka amin'ny NP vao avy nomanina sy NP maina: (a) Fizarana ny fidiran'ny insuline FITC amin'ny sela HepG2. (b) Salan'isa jeometrika amin'ny hamafin'ny fluorescence nohadihadiana tamin'ny alàlan'ny cytometry mikoriana (n = 3), *P < 0.05 raha oharina amin'ny insuline maimaim-poana.
Toy izany koa, ny sary CLSM dia naneho fa ny hamafin'ny fluorescence FITC an'ny NP vao avy nomanina misy insuline FITC sy ny NP maina amin'ny alalan'ny famafazana FITC (tsy misy mannitol) dia matanjaka kokoa noho ny an'ny santionany hafa (Sary 6a). Ankoatra izany, miaraka amin'ny fanampiana mannitol, ny viscosity ambony kokoa amin'ny vahaolana dia nampitombo ny fanoherana ny fidiran'ny sela, ka nahatonga ny fihenan'ny fihanaky ny insuline. Ireo valiny ireo dia manondro fa ny NP maina amin'ny alalan'ny famafazana tsy misy mannitol dia naneho ny fahombiazan'ny fidiran'ny sela ambony indrindra satria ny haben'ny poti-javatra dia kely kokoa noho ny an'ny NP maina amin'ny hatsiaka rehefa avy levona indray.
Novidina avy any Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, Kanada) ny Chitosan (lanja molekiola antonony 100 KDa, 75–85% deacetylated). Novidina avy any VWR (Radnor, Pennsylvania, Etazonia) ny Sodium tripolyphosphate (TPP). Avy any Fisher Scientific (Waltham, MA, Etazonia) ny insuline olombelona recombinant nampiasaina tamin'ity fandalinana ity. Novidina avy any Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, Kanada) ny insuline olombelona misy marika Fluorescein isothiocyanate (FITC) sy ny 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI). Avy any ATCC (Manassas, Virginia, Etazonia) ny sela HepG2. Ny reagent hafa rehetra dia kilasy analytical na chromatographic.
Manomàna vahaolana CS 1 mg/ml amin'ny alàlan'ny fandrendrehana azy ao anaty rano voadio roa sosona (rano DD) misy asidra asetika 0.1%. Manomàna vahaolana TPP sy insuline 1 mg/ml amin'ny alàlan'ny fandrendrehana azy ireo ao anaty rano DD sy asidra asetika 0.1%. Ny pre-emulsion dia nomanina tamin'ny homogenizer polytron PCU-2-110 haingam-pandeha (Brinkmann Ind. Westbury, NY, Etazonia). Toy izao ny dingana fanomanana: voalohany, ampiana vahaolana TPP 2ml amin'ny vahaolana insuline 4ml, ary afangaro mandritra ny 30 minitra ny fangaro ary afangaro tanteraka. Avy eo, ampiana tsikelikely amin'ny vahaolana CS amin'ny alàlan'ny syringe miaraka amin'ny famoretana haingam-pandeha (10,000 rpm) ny vahaolana mifangaro. Notazonina tao anaty rano fandroana ranomandry nandritra ny 30 minitra ny fangaro, ary namboarina tamin'ny pH iray mba hahazoana NP insuline mifamatotra. Mba hampitovy kokoa sy hampihenana ny haben'ny poti-javatra amin'ny NP insuline, dia... nojerena nandritra ny 30 minitra fanampiny tao anaty rano mandro amin'ny alalan'ny fampiasana fitaovana fijerena taratra (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Alemaina).
Notsapaina ny savaivony Z-average, ny polydispersity index (PDI) ary ny zeta potential ny insuline NPS tamin'ny fampiasana fandrefesana dynamic light scattering (DLS) tamin'ny fampiasana Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Aotrisy) tamin'ny fanalefahana azy ireo tao anaty rano DD tamin'ny 25°C. Nojerena tamin'ny alalan'ny mikroskopia elektrôna fandefasana Hitachi H7600 (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japon) ny morphology sy ny fizarana habe, ary nohadihadiana avy eo ny sary tamin'ny fampiasana rindrambaiko sary Hitachi (Hitachi, Tokyo, Japon). Mba hanombanana ny fahombiazan'ny encapsulation (EE) sy ny fahafaha-mamoaka (LC) an'ny insuline NP, dia natsofoka tao anaty fantsona ultrafiltration misy lanja molekiola 100 kDa ny NP ary notsindrina tamin'ny 500 xg nandritra ny 30 minitra. Ny insuline tsy tafiditra tao anaty filtrate dia norefesina tamin'ny fampiasana rafitra Agilent 1100 Series HPLC (Agilent, Santa Clara, Californie, Etazonia) izay ahitana paompy quaternary, autosampler, tsanganana. fanafanana, ary mpitsikilo DAD. Nohadihadiana tamin'ny alalan'ny tsanganana C18 (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, Etazonia) ny insuline ary hita tamin'ny 214 nm. Ny dingana finday dia acetonitrile sy rano, misy 0.1% TFA, tahan'ny gradient manomboka amin'ny 10/90 ka hatramin'ny 100/0, ary niasa nandritra ny 10 minitra. Navoaka tamin'ny tahan'ny fikorianan'ny 1.0 ml/min ny dingana finday. Napetraka ho 20 °C ny mari-pana ao amin'ny tsanganana. Kajy ny isan-jaton'ny EE sy LC amin'ny fampiasana ny fampitoviana.(1) sy Eq.(2).
Notsapaina ny tahan'ny CS/insulina isan-karazany manomboka amin'ny 2.0 ka hatramin'ny 4.0 mba hanatsarana ny insuline NP. Nampiana fatra samihafa ny vahaolana CS nandritra ny fanomanana, raha tsy niova kosa ny fangaro insuline/TPP. Nomanina tao anatin'ny pH 4.0 ka hatramin'ny 6.5 ny Insuline NPs tamin'ny alàlan'ny fanaraha-maso tsara ny pH-n'ny fangaro rehefa avy nampiana ny vahaolana rehetra (insulina, TPP ary CS). Nojerena tamin'ny pH samihafa sy ny tahan'ny lanjan'ny CS/insulina ny EE sy ny haben'ny poti-javatra insuline mba hanatsarana ny fiforonan'ny insuline NPs.
Napetraka teo amin'ny fitoeran-javatra aluminium ireo insuline NP nohatsaraina ary norakofana lamba nohenjana tamin'ny kasety. Taorian'izay, napetraka tao anaty milina fanamainana mangatsiaka Labconco FreeZone (Labconco, Kansas City, MO, Etazonia) misy milina fanamainana lovia ireo fitoeran-javatra vita amin'ny visy. Napetraka tamin'ny -10 °C, 0.350 Torr nandritra ny 2 ora voalohany, ary 0 °C sy 0.120 Torr nandritra ny 22 ora sisa tamin'ny 24 ora mba hahazoana insuline NP maina.
Nampiasaina hamoronana insuline voafono ny Buchi Mini Spray Dryer B-290 (BÜCHI, Flawil, Soisa). Ireo masontsivana fanamainana nofantenana dia: mari-pana 100 °C, fikorianan'ny sakafo 3 L/minitra, ary fikorianan'ny entona 4 L/minitra.
Nojerena tamin'ny alalan'ny spectroscopy FTIR-ATR ireo NP insuline taloha sy taorian'ny tsy fahampian-drano. Nohadihadiana tamin'ny alalan'ny spectrophotometer Spectrum 100 FTIR (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, Etazonia) miaraka amin'ny fitaovana santionany ATR manerantany (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, Etazonia) ireo nanoparticles maina sy ny insuline maimaim-poana ary ny chitosan. Azo avy amin'ny scan 16 tamin'ny famaha 4 cm2 amin'ny elanelam-peo matetika 4000-600 cm2 ny salan'isa famantarana.
Nodinihina tamin'ny alalan'ny sary SEM an'ireo NP insuline maina sy maina noho ny hatsiaka izay nalaina tamin'ny alalan'ny Helios NanoLab 650 Focused Ion Beam-Scanning Electron Microscope (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, Etazonia) ny endriky ny insuline maina. Ny masontsivana lehibe nampiasaina dia ny voltase 5 keV sy ny courant 30 mA.
Naverina levona tao anaty rano dd ireo NP insuline maina rehetra. Notsapaina indray ny haben'ny poti, ny PDI, ny EE ary ny LC tamin'ny fampiasana ny fomba voalaza tetsy aloha mba hanombanana ny kalitaony aorian'ny tsy fahampian-drano. Norefesina ihany koa ny fahamarinan'ny NP anhydroinsulin tamin'ny alàlan'ny fitsapana ny toetran'ny NP taorian'ny fitahirizana maharitra. Ato amin'ity fandalinana ity, ny NP rehetra taorian'ny tsy fahampian-drano dia notehirizina tao anaty vata fampangatsiahana nandritra ny telo volana. Rehefa afaka telo volana fitahirizana, dia notsapaina ny haben'ny poti, ny PDI, ny EE ary ny LC.
Arotsaho ao anaty ranon-kibo 45 mL misy ranon-kibo namboarina (pH 1.2, misy pepsin 1%), ranon-tsinay (pH 6.8, misy trypsin 1%) na vahaolana chymotrypsin (100 g/mL, ao anaty buffer phosphate, pH 7.8) ny 5 mL amin'ny NP namboarina mba hanombanana ny fahombiazan'ny insuline amin'ny fiarovana ny NP aorian'ny tsy fahampian-drano. Notehirizina tamin'ny 37°C tamin'ny hafainganam-pandeha 100 rpm izy ireo. Nangonina tamin'ny fotoana samihafa ny vahaolana 500 μL ary voafaritra tamin'ny alàlan'ny HPLC ny fifantohan'ny insuline.
Notsapaina tamin'ny alalan'ny fomba "dialysis bag" (lanja molekiola 100 kDa, Spectra Por Inc.) ny fihetsiky ny famoahana in vitro an'ireo NP insuline vao nomanina sy nohamainina. Ireo NP maina vao nomanina sy nohamainina dia nodiolisa tao anaty ranoka amin'ny pH 2.5, pH 6.6, ary pH 7.0 (0.1 M phosphate-buffered saline, PBS) mba hanahafana ny tontolo pH ao amin'ny vavony, duodenum, ary ny tsinay kely ambony. Notehirizina tamin'ny 37 °C ny santionany rehetra miaraka amin'ny fihozongozonana mitohy amin'ny 200 rpm. Atsobohy ivelan'ny kitapo dialysis 5 mL amin'ireto fotoana manaraka ireto ny ranoka: 0.5, 1, 2, 3, 4, ary 6 ora, ary fenoy avy hatrany amin'ny dialysate vaovao ny habetsahana. Nohadihadiana tamin'ny alalan'ny HPLC ny fahalotoan'ny insuline ao amin'ny ranoka, ary ny tahan'ny famoahana insuline avy amin'ny nanoparticles dia nokajiana avy amin'ny tahan'ny insuline afaka avoaka amin'ny insuline manontolo ao anaty nanoparticles (Equation 3).
Nobeazina tao anaty lovia 60 mm ny sela HepG2 voan'ny kanseran'ny aty amin'ny olombelona tamin'ny fampiasana ny Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) misy serum bovine foetus 10%, penicillin 100 IU/mL, ary streptomycin 100 μg/mL29. Notazonina tamin'ny mari-pana 37°C, hamandoana 95%, ary CO2 5% ny kolontsaina. Ho an'ny fanadihadiana momba ny fidiran'ny sela, dia nafafy tamin'ny sela 1 × 105/ml ny sela HepG2 teo amin'ny rafitra slide Nunc Lab-Tek misy lavaka 8 (Thermo Fisher, NY, Etazonia). Ho an'ny fanadihadiana momba ny cytotoxicity, dia nafafy tao anaty lovia misy lavaka 96 (Corning, NY, Etazonia) tamin'ny hakitroky ny sela 5 × 104/ml.
Nampiasaina hanombanana ny mety ho poizina ateraky ny insuline NPs30 vao avy nomanina sy maina ny fitiliana MTT. Nafafy tao anaty takelaka 96-lavaka ny sela HepG2 tamin'ny hakitroky ny sela 5 × 104/mL ary novolena nandritra ny 7 andro talohan'ny fitiliana. Nohafohezina tamin'ny fifantohana samihafa (50 hatramin'ny 500 μg/mL) tao anaty fitaovana fambolena ny insuline NPs ary avy eo nampidirina tao anaty sela. Rehefa afaka 24 ora nivoahana, dia nosasana in-3 tamin'ny PBS ny sela ary novolena tamin'ny fitaovana misy MTT 0.5 mg/ml mandritra ny 4 ora fanampiny. Notombanana ny mety ho poizina ateraky ny cytotoxicity tamin'ny fandrefesana ny fihenan'ny anzima ny tetrazolium MTT mavo ho lasa formazan volomparasy amin'ny 570 nm amin'ny fampiasana mpamaky takelaka Tecan infinite M200 pro spectrophotometer (Tecan, Männedorf, Soisa).
Notsapaina tamin'ny alalan'ny mikroskopia fitiliana laser confocal sy ny fanadihadiana cytometry mikoriana ny fahombiazan'ny fidiran'ny sela ao amin'ny NP. Ny lavaka tsirairay ao amin'ny rafitra slide chamber Nunc Lab-Tek dia notsaboina tamin'ny FITC-insulin maimaim-poana, FITC-insulin-loaded NPs, ary naverina namboarina 25 μg/mL amin'ny FITC-insulin NPs maina amin'ny fifantohana mitovy ary notehirizina nandritra ny 4 ora. Nosasana in-3 tamin'ny PBS ny sela ary nohavaozina tamin'ny 4% paraformaldehyde. Nolokoina tamin'ny 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ny nokleary. Nojerena ny toerana misy ny insuline tamin'ny fampiasana mikroskopia fitiliana laser/fotona roa Olympus FV1000 (Olympus, Shinjuku City, Tokyo, Japon). Ho an'ny fanadihadiana cytometry mikoriana, ny fifantohana mitovy amin'ny 10 μg/mL FITC-insulin maimaim-poana, FITC-insulin-loaded NPs, ary FITC-insulin NPs maina dia nampiana tamin'ny takelaka 96-lavaka voafafy sela HepG2 ary notehirizina nandritra ny. 4 ora. Rehefa afaka 4 ora niompiana, dia nesorina ireo sela ary nosasana in-3 tamin'ny FBS. 5 × 104 sela isaky ny santionany no nodinihina tamin'ny alalan'ny BD LSR II flow cytometer (BD, Franklin Lakes, New Jersey, Etazonia).
Ny sanda rehetra dia aseho amin'ny salan'isa ± fivilian-dàlana mahazatra. Ny fampitahana eo amin'ny vondrona rehetra dia nodinihina tamin'ny fampiasana ANOVA tokana na fitsapana-t nataon'ny IBM SPSS Statistics 26 ho an'ny Mac (IBM, Endicott, New York, Etazonia) ary ny p < 0.05 dia noheverina ho manan-danja ara-statistika.
Ity fandalinana ity dia mampiseho ny fahafahan'ny fanamainana amin'ny alalan'ny famafazana maina ny nanoparticles chitosan/TPP/insulin mifamatotra amin'ny alalan'ny famafazana maina miaraka amin'ny fanamboarana tsara kokoa raha oharina amin'ny fomba fanamainana mangatsiaka mahazatra mampiasa agents bulking na cryoprotectants capacity ary capacity enta-mavesatra ambony kokoa. Ny nanoparticles insuline nohatsaraina dia nahazo haben'ny poti antonony 318 nm ary fahombiazan'ny encapsulation 99.4%. Ny valin'ny SEM sy FTIR taorian'ny fanamainana dia naneho fa ny rafitra boribory dia notazonina tao amin'ny NP maina amin'ny famafazana misy sy tsy misy mannitol ary lyophilized tamin'ny mannitol ihany, fa ny NP maina tsy misy mannitol dia simba nandritra ny fanamainana. Tao amin'ny fitsapana fahaiza-manao fanamboarana, ny nanoparticles insuline maina amin'ny famafazana tsy misy mannitol dia naneho ny haben'ny poti antonony kely indrindra sy ny enta-mavesatra ambony indrindra rehefa namboarina. Ny fitondran-tenan'ny famoahana ireo NP maina rehetra ireo dia naneho fa navotsotra haingana tao anaty vahaolana pH = 2.5 sy pH = 7 izy ireo, ary tena marin-toerana amin'ny vahaolana pH = 6.5. Raha ampitahaina amin'ny NP maina hafa levona indray, ny NP Ny maina amin'ny famafazana tsy misy mannitol no naneho ny famoahana haingana indrindra. Mifanaraka amin'izay hita tamin'ny fanadihadiana momba ny fidiran'ny sela io vokatra io, satria ny NP maina amin'ny famafazana raha tsy misy mannitol dia saika nitazona tanteraka ny fahombiazan'ny fidiran'ny sela amin'ny NP vao voaomana. Ireo vokatra ireo dia manondro fa ny nanoparticles insuline maina nomanina tamin'ny fanamainana amin'ny famafazana tsy misy mannitol dia mety indrindra amin'ny fanodinana bebe kokoa ho endrika fatra tsy misy rano, toy ny takelaka am-bava na sarimihetsika bioadhesive.
Noho ny olana momba ny fananana ara-tsaina, ireo angon-drakitra novokarina sy/na nohadihadiana nandritra ny fanadihadiana ankehitriny dia tsy azo jerena ho an'ny daholobe, fa azo jerena kosa amin'ireo mpanoratra tsirairay avy raha misy fangatahana ara-drariny.
Kagan, A. Diabeta karazany 2: fiaviana ara-tsosialy sy ara-tsiansa, fahasarotana ara-pitsaboana, ary fiantraikany amin'ny marary sy ny hafa. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. Ny fivoaran'ny famonosana insuline: azo atao ve ny mampiasa azy am-bava ankehitriny? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Fandrosoana vao haingana amin'ny rafitra fanaterana liposome am-bava misy insuline ho fitsaboana diabeta.Interpretation.J. Pharmacy.549, 201–217 (2018).